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1、論文題目：Cu2+對羅氏沼蝦幾種同工酶的影響學科專業(yè)：動物學學位申請人：俞亞東指導教師：許燕副教授摘要羅氏沼蝦(MaorobrachJumrosenbergYi)，因肉多味美、營養(yǎng)價值高等優(yōu)點，受到人們的歡迎，其養(yǎng)殖規(guī)模日益擴大。然而隨著工業(yè)廢水和生活污水排入江河湖海，特別是在養(yǎng)殖中頻繁使用硫酸銅清塘滅藻，使得養(yǎng)殖水體中cu2+含量迅速增加，給羅氏沼蝦的養(yǎng)殖帶來了潛在的威脅。銅是甲殼動物重要的營養(yǎng)元素，對多種生長發(fā)育相關的生物酶的組成和功能有著重要作用，但是過量的Cu2+會對蝦體產生毒害。2003年度的《中國漁業(yè)生態(tài)環(huán)境狀況公報》指出，以Cu2+濃度不超過
2、0．Olmg／L為標準，但局部水域污染超標程度卻在增加，如杭州灣、舟山近海和長江口均高達0．07mg／L。因此，研究Cu2+對羅氏沼蝦的影響不僅對深入了解其生理機制具有重要意義，而且對甲殼動物的健康養(yǎng)殖具有重要的參考價值。同工酶作為一種生化指標，已廣泛應用于物種及雜種鑒定、基因表達與調控等研究中。雖然已有很多報道研究重金屬對甲殼動物的毒性作用，但Cu2+污染對羅氏沼蝦同工酶影響的報道尚不多見。在本研究中，我們采用生態(tài)學單因子梯度試驗方法，選取與局部受污染水域中接近的Cu2+濃度(0．08mg／L)，并參考相關文獻與亞急性毒性實驗的要求，配成O．01mg／L
3、、0．08mg／L、0．64mg／L、5．12mg／L濃度梯度。飼養(yǎng)受試蝦一周后，從酶活力、同工酶電泳酶譜和酶細胞化學定位電鏡觀察三個角度探討Cu2+對羅氏沼蝦復眼、鰓、肝胰腺、心臟和肌肉五種組織內幾種同工酶(酯酶(EST)、過氧化物酶(PoD)、超氧化物歧化酶(SOD)、堿性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP))影響，以期了解Cu2+對羅氏沼蝦生理生化的影響，為健康養(yǎng)殖羅氏沼蝦提供參考意見。1．Cu2+對羅氏沼蝦五種組織中EST、POD、SOI)酶活力的影響本文利用分光光度法測定不同濃度Cu2+飼養(yǎng)羅氏沼蝦一周后，其五種組織中EST、POD、SOD的酶
4、活力變化，并對實驗數據用SPSS軟件分析差異顯著性，結果如下：EST活力變化情況：復眼、肌肉和心臟中EST活力弱且變化差異性不顯著，鰓中EST活力受低濃度Cu2+促進，當Cup為0．64mg／L時達到最大，隨后Cu2+為5．12mg／L時下降，各Cu2+處理組均與對照組有顯著差異(P(O．05)；肝胰腺中EST活力總體上成先上升后下降趨勢，在Cu舢為0．Olmg／L時酶活力達到最大，除在Cup為0．64mg／L時略有上升外，其余均成下降趨勢，各Cu2+處理組均與對照組有顯著差異(尺O．05)。POD活力變化情況：復眼、肌肉和心臟中POD活力弱且變化差異性相
5、對不顯著，鰓中POD活力受低濃度Cu2+促進，在Cu2+為0．64mg／L時達到最大，而在5．12mg／L時活力下降，各Cu2+處理組與對照組差異顯著(P(O．05)；肝胰腺中POD活力有一定波動性，先上升，在Cu2+為0．Olmg／L時達到最大，而后下降，在Cu2+為0．64mg／L時略有上升后繼續(xù)下降，各Cu2+處理組與對照組有顯著差異(尺O．05)。SOD活力變化情況：低濃度Cu2+導致五種組織中SOD活力均明顯增加，復眼和心臟中SOD活力在Cu2+為0．08mg／L時達到最大，其余三種組織中SOD活力在Cu2+為0．64mg／L時達到最大。而當Cu
6、2+達到5．12mg／L最高濃度時，導致五種組織中SOD活力的均明顯下降，其中鰓、肝胰腺和心臟中SOD活力變化與對照組差異性較為顯著。總之隨著Cu2+濃度的增加，EST、POD和SOD活力總體上是先上升，后下降，有一定的劑量一一效應關系，在鰓和肝胰腺中尤為明顯，因而可以考慮分析這兩種組織中幾種酶活力的變化來了解Cu2+對蝦體的脅迫程度。2．cu2+對羅氏沼蝦五中組織中BST、POD、SOD同工酶酶譜的影響本文采用聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳技術以及同工酶染色技術，對飼養(yǎng)后蝦體五種組織中EST、POD、SOD進行電泳酶譜分析，發(fā)現三種同工酶在五種組織中的分布和
7、表達具有明顯的組織特異性。結果如下：EST酶譜變化情況：EST在肝胰腺和鰓中表達較強，酶帶數較多，五種組織中均沒有發(fā)現酶帶缺失或新增現象。隨著Cu2+濃度的增加，復眼、心臟和肌肉中酶帶沒有發(fā)現顯著變化；鰓中的六條酶帶成規(guī)律性變化，顏色均先加深，在Cu2+為0．64mg／L時最深，而后在Cu2+為5．12mg／L時均略變淺；肝胰腺中EST表達最強，共有5條酶帶，其中有3條酶帶(Rf=O．078、0．703、0．859)顏色深淺有顯著變化，其變化趨勢與相應酶活力變化相吻合，另有2條酶帶(Rf=O．391、0．469)顏色深淺無明顯變化。POD酶譜變化情況：復眼
8、、心臟和肌肉中POD酶帶數少，且隨著Cu2+濃度的增加，酶帶沒有發(fā)
