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《多西環(huán)素對(duì)兔膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎軟骨及滑膜中mmp-3和timp-1+mrna表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、OAMMP．3ACLTIMP．1RTPRC英文縮略語(yǔ)OsteoarthritisMetalloproteinases-3AnteriorcruciateligamentTissueinhibitorofmetalloproteinases-1ReversetranscriptionPolymerasechainreactionV骨性關(guān)節(jié)炎金屬蛋白酶．3前交叉韌帶金屬蛋白酶組織抑制因子．1逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含
2、為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：日期：』年上月4日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者簽名：翩簽名墅叁眺趟年鰣必-^上-—JL刖舌OA疾病是機(jī)械性和生物性因素相互作用，使關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞
3、、細(xì)胞外基質(zhì)和軟骨下骨合成與降解的正常進(jìn)行失去平衡的結(jié)果【11。軟骨損傷可引起關(guān)節(jié)腫脹、疼痛，甚至不同程度的功能障礙，但也有相當(dāng)一部分人沒有任何癥狀。因此臨床診斷有一定的困難。近年來隨著對(duì)OA研究的深入，對(duì)OA造成的軟骨損傷有了進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)，但是有關(guān)關(guān)節(jié)面損傷的機(jī)制和概率的系統(tǒng)性研究仍然缺乏【2】。隨著生活節(jié)奏的不斷加快和工作、社會(huì)壓力的不斷增高，OA發(fā)病率有所上升。體重、年齡、性別、職業(yè)活動(dòng)、非職業(yè)性體力活動(dòng)、骨礦密度(bonemineraldensity,BMD)等都是OA的相關(guān)因素【3】。在Framingham研究中，女性每年發(fā)生的X線檢查膝關(guān)節(jié)OA為2％，癥狀性關(guān)節(jié)OA為l％：男性的
4、比值分別為1．4％和0．7％141。國(guó)內(nèi)流行病學(xué)調(diào)查顯示OA的人群患病率為4％，男性和女性膝骨關(guān)節(jié)病的患病率峰值分別為24．7％和54．6％【51。近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者在關(guān)節(jié)軟骨的生物力學(xué)方面的研究表明，由于創(chuàng)傷、沖擊、關(guān)節(jié)負(fù)荷異常、過度勞損以及部分的衰老過程，可導(dǎo)致組織的組成、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)發(fā)生改變。當(dāng)關(guān)節(jié)軟骨承受負(fù)荷的強(qiáng)度或頻率異常，就有可能發(fā)生關(guān)節(jié)軟骨損害【6,7,8】。軟骨負(fù)荷超過一定臨界值時(shí)將出現(xiàn)不可逆性損害19'1訓(xùn)。一旦關(guān)節(jié)軟骨損傷造成結(jié)構(gòu)性改變，往往缺乏自我修復(fù)機(jī)制。大多數(shù)作者認(rèn)為，軟骨破壞會(huì)逐漸發(fā)展、擴(kuò)大，而不會(huì)局限、停止，終將影響到關(guān)節(jié)功能，出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛，運(yùn)動(dòng)障礙，發(fā)展成為OA[
5、11,12,13】。對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的深入研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)是介導(dǎo)軟骨破壞的重要因子。MMP一3屬于MMP超家族中的基質(zhì)溶解素亞家族，對(duì)蛋白聚糖有高度的裂解活性，還能裂解纖維連接素、層連蛋白、彈性蛋白以及Ⅵ型和Ⅸ型膠原，并能激活MMP一1降解II型膠原，使關(guān)節(jié)軟骨腫脹，抗外力作用下降，在持續(xù)的高強(qiáng)度應(yīng)力負(fù)荷作用下，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性破壞。因而在OA發(fā)病中的作用尤為重要114J。TIMP．1是MMP的特異性抑制劑，通常TIMP與MMP以酶原形態(tài)按照1：l結(jié)合，從而阻止酶的激活，而當(dāng)酶已經(jīng)激活時(shí)，可直接抑制酶的活性【l51。針對(duì)上
6、述問題，本實(shí)驗(yàn)通過ACLT建立創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，并在膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射多西環(huán)素，觀察多西環(huán)素對(duì)兔骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨和滑膜中MMP．3、TIMP．1mRNA的影響，從而探討多西環(huán)素在治療骨關(guān)節(jié)炎方面的作用機(jī)制，為臨床預(yù)防與治療創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1．1主要材料第一章材料與方法1．1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年健康新西蘭大白兔16只，體重1．5"---2．0kg，平均1．83kg，雌雄不限。由湖南省人民醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室提供。1．1．2主要試劑兔beta—actinDNA序列MMP一3、TIMP一1DNA上下游引物RT試劑盒，PCR試劑盒Trizol注射用多西環(huán)素注射用青霉素1．1．3輔助試劑液氮三氯甲
7、烷(分析純)異丙醇(分析純)DEPC水1．1．4主要儀器SartoriusCP225D電子分析天平Eppendorfcentrifuge5415R離心機(jī)TGL一16A臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)DDY--7C型電泳儀GeneAmpPCRsystem9700Syngene凝膠成像系統(tǒng)UV-2550分光光度議2武漢博士德生物工程公司合成上海生工生物工程公司合成美國(guó)Ferments公司生產(chǎn)美國(guó)Invitrigen公司生產(chǎn)哈爾
