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《凡納濱對(duì)蝦酚氧化酶原激活因子和細(xì)胞黏附蛋白基因克隆與序列分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)UDCS917碩士學(xué)位論文凡納濱對(duì)蝦酚氧化酶原激活因子和細(xì)胞黏附蛋白基因的克隆與序列分析論文答辯日期2Q12生§月2壘旦學(xué)位授予日期2Q12生魚月2墨旦廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)聲明YIll12l14lloLII7M3I18ll嶝本人聲明所呈交的論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過的材料。與我一同工作的同事對(duì)本論文的研究工作所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下
2、所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬?gòu)V西大學(xué)。本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即：學(xué)校有權(quán)保存并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于：口保密，在年解密后適用授權(quán)?？诓槐Ｃ堋?請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“√")論文作者簽名：復(fù)磊磊指導(dǎo)教師簽名：姆毫節(jié)作者聯(lián)系電話：f2Z厶c}羅髻7仁日期：'lo12、∥．1少日期≥D肌莎．1／鄉(xiāng)電子郵箱：；；z7時(shí)?踞@77．[一印本課題研究
3、受廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目“南美白對(duì)蝦種質(zhì)評(píng)定與高產(chǎn)品系選育，，項(xiàng)目資助納濱對(duì)蝦酚氧化酶原激活因子和細(xì)胞黏附蛋白基因的克隆與序列分析摘要無脊椎動(dòng)物沒有真正的抗體和獲得性免疫系統(tǒng)，主要依靠先天性免疫系統(tǒng)來抵御外來病原微生物的侵害。酚氧化酶原激活系統(tǒng)(Prophenoloxidaseactivatingsystem，pro．PO)是無脊椎動(dòng)物先天免疫機(jī)制中具有重要作用的免疫系統(tǒng)。酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidaseactivatingfactor，PPAF)和細(xì)胞黏附蛋白(Peroxinectin，PX)基因是酚氧化酶原激活系統(tǒng)
4、中的兩個(gè)重要因子，這些免疫相關(guān)因子是如何抵御病原微生物入侵，如何參與機(jī)體的免疫活動(dòng)一直以來受到廣泛關(guān)注，因此本研究通過RACE方法首次克隆了PPAF的cDNA全長(zhǎng)(GenBank登錄號(hào)JQ684529)，及PX基因的部分序列，并對(duì)2個(gè)基因序列進(jìn)行初步分析；通過半定量PCR分別對(duì)2個(gè)基因進(jìn)行了不同組織的表達(dá)譜分析，研究結(jié)果如下：1．PPAF基因eDNA全長(zhǎng)1986bp，其中含有一個(gè)1629bp開放閱讀框(ORE)，兩翼分別存在21bp(5’端)和336bp(3’端)的非翻譯區(qū)。該基因的開放閱讀框共編碼542個(gè)氨基酸，以SMART軟件分析該氨基酸序列
5、，269．517a區(qū)域是其功能域，是胰蛋白酶家族的絲氨酸蛋白酶；494．502a區(qū)域有一個(gè)ALPHA．2巨球型免疫蛋白功能位點(diǎn)；316．321a區(qū)域有一個(gè)組氨酸酶活性位點(diǎn)。進(jìn)化樹分析表明凡納濱對(duì)蝦PPAF基因與斑節(jié)對(duì)蝦的同源性最高，與果蠅、蚊的同源性最低。通過半定量PCR分析發(fā)現(xiàn)該基因在正常對(duì)蝦的心臟、肝胰腺、腸、胃和肌肉中的表達(dá)量沒有差別，血液中的表達(dá)量明顯高于其他組織；在感染IHHNV病毒的對(duì)蝦的組織中的表達(dá)量下降明顯，但是血液中的表達(dá)量仍明顯高于其他組織。2．PX基因部分cDNA序列長(zhǎng)度為1529bp，分析發(fā)現(xiàn)該序列含有1個(gè)1308bp的開
6、放閱讀框(ORF)，3’端含有1個(gè)長(zhǎng)度為221bp的非翻譯區(qū)，開放閱讀框共編碼436個(gè)氨基酸。所獲得的PX氨基酸序列理論等電點(diǎn)為4．64，分子量為48．86945KDa。經(jīng)SignalP軟件分析發(fā)現(xiàn)此氨基酸序列在72．86a區(qū)域有信號(hào)肽特征，82a是信號(hào)肽剪切位點(diǎn)的可能性最大。通過MotifScan程序?qū)ζ浒被嵝蛄羞M(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該氨基酸序列在其336．378a處有氧化物酶功能域；在172．179a處有一個(gè)八肽銅錨定位點(diǎn)；進(jìn)化性分析表明PX序列與斑節(jié)對(duì)蝦編碼的氨基酸序列最高，與果蠅的相似度最低：半定量PCR分析發(fā)現(xiàn)該基因在正常對(duì)蝦的血液中表達(dá)量最
7、高，肝胰腺次之，在心臟、腸、胃和肌肉中的表達(dá)量沒有差別，該基因在IHHNV病毒感染對(duì)蝦的血液、心臟、肝胰腺、腸、胃和肌肉中的表達(dá)量下降明顯，但在血液和肝胰腺中的表達(dá)量仍比其他組織要高。關(guān)鍵詞：Litopenaeusvannamei；酚氧化酶原激活因子；細(xì)胞黏附蛋白基因；IHHNV病毒；序列分析IICloningandsequenceanalysingoflitopenaeusvannameipolyphendoxidaseactivatedfactorandPeroxinectingeneABSTRACTInsteadofrealantibodi
8、esandacquiredimmunesystem，Invertebratesmainlyrelyontheinnateimmunesy
