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《嗜酸氧化亞鐵硫桿菌arsh蛋白鐵還原酶活性的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、密級liiiiIIiIirllrIrlllIII『Y1915038碩士學位論文嗜酸氧化亞鐵硫桿菌ArsH蛋白鐵還原酶活性的研究FerricreductaseactivityoftheArsHproteinfromAcidithiobacillus?errooxtctans^●■作者姓名：莫宏宇學科專業(yè)：生物工程學院_(系、所)：資源加工與生物工程學院指導教師：曾嘉副教授論文答辯日期五Ⅱ二竺少答辯委員會主席扭中南大學2011年5月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地
2、方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名乞墓巨幺日期：赳年互月區(qū)日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留學位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權(quán)中國科學技術(shù)信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務
3、。作者簽名雄新簽名縋日期．蚶幽塵日碩士學位論文摘要摘要抗砷基因普遍存在于細菌和真菌中，研究發(fā)現(xiàn)嗜酸氧化亞鐵硫桿菌中存在著四種抗砷基因(arsB,arsC,arsR和arsH)，其中前三種基因的功能以及它們各自的抗砷機制都已得到闡述，然而，a坶H基因的生物學功能卻不清楚。為了研究該基因的功能，本論文眥．ferrooxidans菌中克隆出了arsH基因，并且在大腸桿菌中表達，通過一步親和層析法純化了來自嗜酸氧化亞鐵硫桿菌的ArsH蛋白，表達的蛋白分子量為28KDa，含有FMN，是一種依賴于NADPH的黃素蛋白氧化還原酶，并且我們第一次報道了來源于嗜酸氧化亞鐵
4、硫桿菌的ArsH蛋白表現(xiàn)出了很高的鐵還原酶活性，通過定點突變技術(shù)構(gòu)建了ArsH蛋白的突變體，E104A，E104D，E104Q。通過紫外一可見掃描及活性檢測證實谷氨酸104殘基對于維持FMN輔因子的穩(wěn)定性是必須的。ArsH蛋白可能在細菌體內(nèi)對鐵的代謝起著重要的作用。關(guān)鍵詞嗜酸氧化亞鐵硫桿菌，ArsH，黃素氧還蛋白還原酶，鐵還原酶碩士學位論文ABSTRACTABSTRACTArsenicresistancegenesarewidespreadinbacteriaandeukaryotes，fourarsenic—resistancegenes(arsB,a
5、rsC,arsH,arsR)havebeendiscoveredinAcidithiobacillusferrooxidans．Theirgenesequenceshavebeenidentifiedandthreedifferentarsenic．resistancemechanismshavebeenelucidated，however，thebio—functionofthearsHinAt．ferrooxidansremainsunclear．InordertoevaluatethefunctionofthearsHgene，weclonedan
6、dexpressedthegenefromA．ferrooxidansinE．coli，andpurifiedtheArsHproteinbyone-stepaffinitychromatography，withamolecularmassof28kDa，containedFMNdomain．TheArsHproteinwasannotatedasaNADPH—dependentFMNreductase．HerewereportedforthefirsttimethattheArsHproteinshowedhighferricreductaseacti
7、vityandconstructedthemutantexpressionplasmid(E104A，E104D，E104Q)oftheproteinusingsite—directedmutagenesis．TheUV-VisscanningandactivitytestresultsconfirmedthatGlul04wasanessentialresidueformaintainingthestabilityoftheFMNcofactor．TheArsHproteinmayperformallimportantroleforcytosolicf
8、erricironassimilation／nvivo．KEYWORDSAcid
