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《afmnpv誘導(dǎo)凋亡sl-1細(xì)胞中凋亡體的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中師范大學(xué)碩士學(xué)位論文AfMNPV誘導(dǎo)凋亡SL--1細(xì)胞中凋亡體的研究姓名：宋娜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：彭建新201205⑨碩士學(xué)位論文MASTER’STHESIS摘要細(xì)胞凋亡是多細(xì)胞動物中一種進(jìn)化上保守的，用來清除衰老損傷細(xì)胞的一種機(jī)制。對于哺乳動物細(xì)胞中凋亡信號通路的研究，已經(jīng)比較清楚，研究表明主要存在外源性信號通路和內(nèi)源性信號通路。其中在內(nèi)源性信號通路中，線粒體通過釋放像細(xì)胞色素C(cytochromec)這樣的死亡因子來執(zhí)行細(xì)胞凋亡。cytochromeC一旦從線粒體中釋放出來便會
2、同Apaf-1結(jié)合并在dATP的參與下募集procaspase一9(形成凋亡體)導(dǎo)致其活化，并引發(fā)隨后的效應(yīng)caspase活化的級聯(lián)反應(yīng)，其中凋亡體起著重要的作用。我們以前的研究表明芹菜夜蛾核型多角體病毒(AfMNPV)能誘導(dǎo)鱗翅目斜紋夜蛾S1-1細(xì)胞發(fā)生凋亡，并發(fā)現(xiàn)在凋亡過程中會出現(xiàn)線粒體膜電位降低，cytochromeC從線粒體釋放至細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的現(xiàn)象，表明其凋亡信號通路同哺乳動物線粒體信號通路相似。為了進(jìn)一步闡明Af／VINPV或放線菌素D誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡的凋亡機(jī)制，本文對AfMNPV或放線菌素D在誘導(dǎo)SL-1
3、細(xì)胞凋亡過程中，線粒體信號通路中組成凋亡體的各個組分進(jìn)行了初步探究。運(yùn)用westernBlot技術(shù)檢測到了SL一1細(xì)胞中組成凋亡體的三種組分：Apaf一1，caspase一9和cytoc}們mec，運(yùn)用Co—IP技術(shù)發(fā)現(xiàn)了Apaf-1同caspase-9之間的相互作用，并測定了caspase酶活性等，初步探究了凋亡體的抑制劑5’對氟磺酰苯甲酰腺苷鹽酸鹽(FSBA)對桿狀病毒或放線菌素D誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡的影響。1、AfMNPV或放線菌素D誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡過程中凋亡體各個組分的表達(dá)情況及caspase酶活性分析通過
4、WesternBlot結(jié)果顯示，AfMNPV誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡6h時細(xì)胞質(zhì)中Apaf-1的含量會升高，procaspase-9的含量由于活化而降低，并且隨著時間的延長而逐漸降低；cytocl啪meC會從線粒體中釋放出來導(dǎo)致其含量升高。放線菌素D處理組的結(jié)果同AfMNPV類似，不同之處是procaspase一9會在處理后6h表達(dá)量升高，隨后才下降。通過Co-IP技術(shù)可以檢測到在AflANPV(或放線菌素D)誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡12h時Apaf-1和procaspase-9的相互作用。通過對SL-1細(xì)胞凋亡過程中casp
5、ase一9，caspase一3酶活性的測定發(fā)現(xiàn)，AfMNPV(或放線菌素D)在誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡過程6h均能出現(xiàn)caspase-9，caspase-3活化的現(xiàn)象。caspase-9的酶活力隨著時間的延長而緩慢升高。AfMNPV處理組的caspase-3酶活在18h時還有較高的酶活力，放線菌素D處理組caspase-3酶活則⑨碩士學(xué)位論文MASTER’STHESIS在6h和12h時較高。2．FSBA對AfMNPV或放線菌素D誘導(dǎo)的SL-1細(xì)胞凋亡的抑制作用FSBA是凋亡體抑制劑，細(xì)胞在最終濃度為50州、100州和200
6、蹦FSBA存在條件下，AfMNPV或放線菌素D誘導(dǎo)的SL-1細(xì)胞凋亡，細(xì)胞經(jīng)DAPI染色，顯微觀察發(fā)現(xiàn)，不同濃度的FSBA均能抑制桿狀病毒或放線菌素D誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示FSBA抑制桿狀病毒或放線菌素D誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有濃度依賴性，且主要抑制細(xì)胞凋亡的晚期細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。caspase-3酶活力的分析表明，F(xiàn)SBA能夠明顯抑制AfMNPV或放線菌素D誘導(dǎo)的SL一1細(xì)胞凋亡過程中的caspase一3酶活性。這些研究表明在桿狀病毒或放線菌素D誘導(dǎo)的SL-1細(xì)胞凋亡過程中，涉及凋亡體的形成和它介導(dǎo)的caspas
7、e級聯(lián)反應(yīng)。關(guān)鍵詞：細(xì)胞凋亡；桿狀病毒；放線菌素D；Caspasc；凋亡體；FSBAⅡAbstractInmulti—cellularanimals，apoptosisisallevolutionarilyconservedmechanismusedtoremovetheagingdamagecells．Cellapoptosissignalingpathwayshavebeenrelativelyclearlyresearchedinmammaliancells，andresearchhaveshownthatthe
8、remainexistestwosignalingpathways：exogenoussignalingpathwaysandendogenoussignalingpathways．Intheendogenoussignalingpathway,mitochondriareleasesthedeathfactor(suchascy
