gexp多重rt-pcr技術(shù)在病毒性腦炎病原檢測中的應(yīng)用

《gexp多重rt-pcr技術(shù)在病毒性腦炎病原檢測中的應(yīng)用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、中圖分類號：R373．3學(xué)科分類號：310．41論文編號：密級：公玨安徽理工大學(xué)碩士學(xué)位論文GeXP多重RT—PCR技術(shù)在病毒性腦炎病原檢測中的應(yīng)用作者姓名：魚玲——專業(yè)名稱：一疸厘生物堂研究方向：～蹙染絲瘞疸導(dǎo)師姓名：王直霞熬攮導(dǎo)師單位：答辯委員會論文答辯日期：2012年3月萬日安徽理工大學(xué)研究生處2012年5月21日ADissertationinpathogenbiologyDevelopmentofaGeXPbasedmultiplexRT—-PCRassay。。rsimultaneousdetectionofeightarboviruseassociatq!dlorsimultane

2、ousdetectionoleightarboviruseassociatedwithphalitiswithencephalitisCandidate：HeBinSupervisor：WangKexiaSch001ofMedicineAnHuiUniversityofScienceandTechnologyNo．168，ShungengRoad，Huainan，232001，P．R．CHINA獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方以外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得塞徵堡王

3、太堂或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：么：馬彰幺日期：翟竺年—，月習(xí)日一／J學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解塞邀堡王太堂有保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬于塞邀理工大堂。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽理工大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：白導(dǎo)

4、師簽名：形蓀簽字日期例啤蝴夕簽字日期：勱啤瑚≯摘要目的利用GeXP多重基因表達遺傳分析系統(tǒng)，建立一種能夠同時檢測腦炎相關(guān)的8種蟲媒病毒的多重逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(mRT-PCR)方法，并對此方法作出初步評價。方法以腦炎相關(guān)的8種蟲媒病毒為研究對象，包括版納病毒(Bannavirus，BAV)，乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)，蜱傳腦炎病毒(Tick—borneencephalitisvirus，TBEV)，Tahyna病毒(Tahynavirus，TAHV)，遼寧病毒(Liaoningvirus，LNV)，科薩努爾森林病病毒(Kyasanurfore

5、stdiseasevirus，KFDV)，辛德畢斯病毒(Sindbisvirus，SINV)及云南環(huán)狀病毒(Yunnanorbivirus，YUOV)并加入小鼠腦脊髓炎病毒(Theiler’SMouseEncephalomyelitisvirus，TMEV)做為內(nèi)部對照。利用GeXP系統(tǒng)建立多重RT-PCR檢測方法，設(shè)計各病毒特異引物并進行篩選，以病毒分離培養(yǎng)物和陽性標本來驗證引物及多重反應(yīng)體系的特異性，根據(jù)PCR結(jié)果來優(yōu)化多重反應(yīng)體系及反應(yīng)條件，構(gòu)建單克隆質(zhì)粒并進行體外轉(zhuǎn)錄并制備標準品即體外轉(zhuǎn)錄RNA的梯度稀釋液來檢測多重體系的靈敏度。用該方法對未知標本進行檢測，并將檢測結(jié)果與其它方法進行

6、比較，根據(jù)比較的結(jié)果對該方法做出評價。結(jié)果篩選后的各病毒引物擴增片段大小與設(shè)計相符且特異性強，相互之間無交叉反應(yīng)。優(yōu)化后的多重檢測體系，可擴增出各病毒對應(yīng)的特異片段，可在102拷貝／此水平同時并特異地檢測出8種(共13個特異片段)腦炎相關(guān)蟲媒病毒P-dNA。通過對37份蚊蟲碾磨液提取核酸的標本檢測，可看出GeXP多重檢測方法特異性強，且靈敏度明顯高于病毒分離及半巢式PCR。結(jié)論成功建立了一種基于GeXP的多重RT-PCR技術(shù)平臺的8種腦炎相關(guān)蟲媒病毒的檢測新方法，該方法具有高通量、靈敏度高、特異性強且快速等優(yōu)點，對病毒性腦炎的分子診斷及流行病學(xué)調(diào)查具有重要意義。圖10表6參42關(guān)鍵詞：GeX

7、P系統(tǒng)；病毒性腦炎；多重RT-PCR分類號：R373．3；摘要Abstractobjective：TodevelopaGeneomeLabGeneticAnalysisSystem(GeXP)basedmultiplexreversetranscription—polymerasechainreaction(mRT-PCR)assayforsimultaneousdetectionofeightarbovir