sox10在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中的作用及機制

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1、碩士學位論文Sox10在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中的論文題目作用及機制研究生姓名衡磊指導教師姓名張學光郭亞軍專業(yè)名稱免疫學研究方向腫瘤免疫論文提交日期2012年5月ISox10在腫瘤增殖轉(zhuǎn)移中的作用及機制中文摘要Sox10在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中的作用及機制中文摘要目的：Sox10是Sox家族的重要成員，我們前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤細胞系中存在高甲基化狀態(tài)伴隨mRNA表達水平下降，提示Sox10是潛在的抑癌基因，但其表達下調(diào)在腫瘤中的生物學功能及具體的分子機制尚不清楚。方法：建立高效表達Sox10的慢病毒系統(tǒng)，感染Sox10表達缺失的KYSE150、HCT116和HCC-

2、LM3細胞，Realtime-PCR和WesternBlot法檢測Sox10基因在腫瘤細胞系中的表達。通過MTS，克隆形成實驗，軟瓊脂形成及裸鼠皮下成瘤實驗檢測上調(diào)Sox10對細胞增殖的影響；通過TUNEL實驗檢測Sox10對細胞凋亡的影響；通過劃痕實驗、Transwell實驗和裸鼠皮下-肺轉(zhuǎn)移模型檢測Sox10對腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的影響；并通過免疫共沉淀和熒光素酶報告基因技術(shù)檢測Sox10基因?qū)NT/β-catenin信號通路的調(diào)控作用。結(jié)果：成功構(gòu)建高效表達Sox10的慢病毒系統(tǒng)，Realtime-PCR和WesternBlot法證實Sox10基因在KYSE1

3、50、HCT116和HCC-LM3細胞中高效表達。共聚焦熒光顯微鏡顯示Sox10定位于細胞核。體內(nèi)外實驗表明，與對照組相比，上調(diào)Sox10表達能顯著抑制腫瘤細胞的克隆形成能力，體內(nèi)成瘤能力并促進腫瘤細胞的凋亡。上調(diào)Sox10的表達水平后能顯著抑制腫瘤細胞的遷移，侵襲能力及肺轉(zhuǎn)移灶的形成，表明Sox10是重要的抑癌基因。免疫共沉淀證實Sox10可與β-catenin相互結(jié)合，熒光素酶報告基因顯示Sox10可抑制β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)論：Sox10可顯著抑制腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移能力，是重要的抑癌基因。Sox10可通過調(diào)節(jié)WNT/β-catenin信號通路

4、發(fā)揮抑癌基因的功能。關(guān)鍵詞：Sox10；細胞增殖；細胞轉(zhuǎn)移；β-catenin作者：衡磊指導教師：張學光教授郭亞軍教授IITheFunctionandMechanismofSox10intumorigenesisandMetastasisAbstractTheFunctionandMechanismofSox10intumorigenesisandMetastasisAbstractObjective:SRY-boxcontaininggene10(Sox10)isamemberofthehighmobilitygroup(HMG)transcriptionf

5、actorsuperfamily.WehavepreviouslyprovedthattheexpressionofSox10wasdiminishedincancercellsduetopromotermethylation.TheaimofthisstudywastoexploretheeffectsandmolecularmechanismofSox10onthedevelopmentofcancer.Methods:ThegeneencodingSox10wasamplifiedandinsertedintopLVX-AcGFP-N1vector.We

6、employedlentivirustoelevatetheexpressionofSox10inhepatocellularcarcinomaHCC-LM3,esophagealcarcinomaKYSE150andcolorectalcarcinomaHCT116celllines,allofwhichhavefullymethylatedandcompletelysilencedSox10.ExpressionofSox10wasdeterminedbyquantitativereverse-transcriptionpolymerasechainrea

7、ctionandwesternblot.ThelocalizationofSox10incancercellswasinvestigatedbyconfocallaserscanningmicroscopy.Cellgrowthwasmeasuredby3-(4,5-dimethyl-thiazol-2yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium(MTS)assay,colonyformationandanchorage-independentgrowthassay.Cellmi

8、grationwasquantifie