黑水虻抗菌肽誘導(dǎo)及粗提物活性研究

黑水虻抗菌肽誘導(dǎo)及粗提物活性研究

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1、遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文黑水虻抗菌肽誘導(dǎo)及粗提物活性研究姓名:趙啟鳳申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):免疫學(xué)指導(dǎo)教師:夏嬙201204遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文黑水虻抗西肽誘導(dǎo)及租提物活性研冗中文捅要黑水虻抗茵肽誘導(dǎo)及粗提物活性研究串中文摘要目的:采用不同誘導(dǎo)方法對黑水虻(HermetiaillueensL.)幼蟲抗菌肽進行誘導(dǎo),并對所提取粗提物進行活性研究,探討黑水虻幼蟲抗菌肽粗提物的抑菌活性及生物學(xué)活性。期待通過本研究豐富昆蟲抗菌肽的種類,并為黑水虻抗菌肽的研發(fā)及利用提供有效的實驗方法。方法:本研究利用大腸桿菌菌液針刺浸泡誘導(dǎo)法誘導(dǎo)黑水虻幼蟲,通過研磨提取法提取幼蟲抗菌肽粗提物確定最

2、佳誘導(dǎo)齡期;采用大腸桿菌菌液、金黃色葡萄球菌菌液注射誘導(dǎo)法,大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌液針刺浸泡誘導(dǎo)法,不同功率、不同時間超聲波誘導(dǎo)法對黑水虻5齡幼蟲進行抗菌肽誘導(dǎo)。利用研磨提取法提取抗菌肽粗提物,并對粗提物分別進行抑菌活性研究。選用抑菌效果最佳的抗菌肽粗提物進行生物學(xué)活性鑒定及利用反相高效液相色譜(RP—HPLC)對粗提物進行初步檢測。結(jié)果:研究表明,黑水虻幼蟲產(chǎn)生抗菌肽的最佳誘導(dǎo)齡期為5齡;不同誘導(dǎo)方法產(chǎn)生抗菌肽對大腸桿菌抑菌活性不同,大腸桿菌菌液針刺浸泡60s,誘導(dǎo)后飼養(yǎng)24h提取的抗菌肽抑菌活性最好;其次為超聲波100W誘導(dǎo)20min產(chǎn)生抗菌肽抑菌活性;其余誘導(dǎo)方

3、法產(chǎn)生抗菌肽也有一定的抑菌效果但與未誘導(dǎo)組相比差異不顯著。生物活性研究表明,黑水虻抗菌肽經(jīng)25℃、37。C、50℃處理10min后仍具有較為理想的抑菌效果;反復(fù)凍融次數(shù)少于4次時對抗菌肽抑菌活性無顯著影響,凍融6次以上抑菌活性減小較為明顯:pH值在5.0—9.0范圍仍可保持抑菌活性,pH<5或pH>9的環(huán)境中無明顯抑菌活性。利用反相高效液相色譜(RP-HPLC)得到抗菌肽獨立峰。結(jié)論:1.誘導(dǎo)黑水虻幼蟲產(chǎn)生抗菌肽的最佳齡期為5齡。2.不同誘導(dǎo)方法產(chǎn)生抗菌肽對大腸桿菌抑菌活性不同。大腸桿菌菌液針刺浸泡60s,誘導(dǎo)后飼養(yǎng)24h提取的抗菌肽抑菌活性最好;其次抑菌活性較高的為10

4、0W超聲波誘導(dǎo)20min產(chǎn)生抗菌肽。3.黑水虻抗菌肽粗提物在25。C、37。C、50。C時均有較好的活性,低溫反復(fù)凍融次數(shù)少于4次時可保持較好抑菌活性;pH值的適宜范圍為5.0-9.0。4.利用反相高效液相色譜(RP--HPLC)得到抗菌肽粗提物獨立峰。+本研究為國家自然科學(xué)基金(31040075)資助項目2遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文黑水虻抗菌肽誘導(dǎo)及粗提物活性研究中文摘要關(guān)鍵詞:黑水虻;抗菌肽;誘導(dǎo);抑菌活性:生物學(xué)活性3遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文黑水虻抗菌肽誘導(dǎo)及租提物活性研究英文摘要PreliminaryResearchonFunctionalRolesinAntimicr

5、obialPeptidesfromCrudeExtractinginBlackSoldierFlyAbstractobjective:FunctionalrolesinantibacterialpeptideswereanalyzedinBlacksoldierfly(HermetiaillucensL.)larvae,Usingaseriesofdifferentinducedways.Accordingly,ourresultscouldprovidetheadditionaltypesofantibacterialpeptidesandtheparametersfo

6、rexperimentalextractionofcrudeextractingfortheantibacterial,antiviralandantitumordrugresearches.Methods:ProductswereharvestedfromBlacksoldierflylarvae,UsingstaphylococcusbacterialiquidinjectioninductionofEcoliandfurthergrindingextractionofcrudeextractingantimicrobialpeptides.Inthisstudy,a

7、cupuncturesoakinginductionwasappliedtoobtainedantibacterialpeptidesinthefifthstageofanimalsinvolvingbacteriumfluidandstaphylococcusaureusbacterialiquid,associatedwithdiversefrequenciesanddifferenttimeinBlacksoldierflylarvae.Moreover,grindingextractionsofantimicrobia

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