雙環(huán)醇對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、bcl-2表達(dá)的影響

雙環(huán)醇對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、bcl-2表達(dá)的影響

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文雙環(huán)醇對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)蛋白Caspase--3、Bcl--2表達(dá)的影響姓名:侯爽爽申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師:崔東來(lái)201203中文摘要雙環(huán)醇對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Caspase一3、Bci一2表達(dá)的影響摘要慢性肝病是一類世界性的嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病,肝纖維化(Hepaticfibrosis)是慢性肝病、肝硬化的共同病理基礎(chǔ),而肝星狀細(xì)胞(Hepaticstellatecells,HSCs)的激活是肝纖維化的關(guān)鍵環(huán)節(jié),活化的肝星狀細(xì)胞合成大量膠

2、原和細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellularmatrix,ECM),引起肝內(nèi)ECM過(guò)量積聚,膠原合成過(guò)多,最終導(dǎo)致肝纖維化的形成,因此誘導(dǎo)活化的肝星狀細(xì)胞凋亡是逆轉(zhuǎn)肝纖維化的重要途徑【1一。雙環(huán)醇是中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制的抗肝炎新藥,化學(xué)名稱為6.甲氧羰基.15.羥甲基.2,3,2,3.雙亞甲二氧基4,4.二甲氧基聯(lián)苯。研究表明,雙環(huán)醇對(duì)多種實(shí)驗(yàn)性急、慢性肝臟損傷均有明顯保護(hù)作用,臨床上用于治療慢性乙型、丙型肝炎己取得了比較好的療效,研究顯示,雙環(huán)醇具有清除氧自由基,抗氧化作用【3,4】,除此之外,雙環(huán)醇可以使肝

3、纖維化大鼠的前膠原肽(PIIIP)水平明顯降低,白蛋白水平顯著增高,雙環(huán)醇對(duì)慢性乙型肝炎的肝纖維化有效,但其作用機(jī)制,特別是是否通過(guò)促進(jìn)HSCs凋亡,發(fā)生抗纖維化的作用尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)觀察雙環(huán)醇對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及凋亡的變化及caspase.3、bcl.2蛋白表達(dá)變化情況,探討雙環(huán)醇對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其可能的機(jī)制,為今后雙環(huán)醇在肝臟纖維化方面的治療提供臨床依據(jù)。.目的:本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)觀察雙環(huán)醇對(duì)體外培養(yǎng)的活化的肝星狀細(xì)胞的增殖與凋亡及凋亡相關(guān)蛋白caspase.3、bcl一2表達(dá)的影響,探討雙環(huán)

4、醇潛在的抗纖維化作用。方法:1、肝星狀細(xì)胞HSC—T6的培養(yǎng):將大鼠肝星狀細(xì)胞株HSC—T6培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)液,其中包含有10%胎牛血清、lOOg/mL鏈霉素、100IU/mL青霉素、和lmol/LHEPES,置于37℃,5%C02恒溫密閉式孵箱內(nèi)培養(yǎng)傳代。實(shí)驗(yàn)分為4組:①空白對(duì)照組(10%血清DMEM培養(yǎng)液、0.02%DMSO)中文摘要②雙環(huán)醇組(O.25mmol/1)⑧雙環(huán)醇組(O.5mmol/1)④雙環(huán)醇組(1mmol/1)⑤不含DMSO組(10%血清DMEM培養(yǎng)液)。2、應(yīng)用MTT法檢測(cè)雙環(huán)醇對(duì)活化的肝星狀

5、細(xì)胞增殖的影響:3、應(yīng)用Hoechst3325染色熒光顯微鏡下檢測(cè)肝星狀細(xì)胞的凋亡率;并應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡率。4、應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)caspase.3蛋白的表達(dá)。5、應(yīng)用Westernblotting檢測(cè)bcl.2蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、雙環(huán)醇對(duì)HSCs增殖的影響:MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖顯示:對(duì)照組與不含DMSO組A490值無(wú)差別,說(shuō)明0.02%DMSO對(duì)HSCs增殖沒(méi)有影響儼>O.05);雙環(huán)醇干預(yù)肝星狀細(xì)胞12h后,隨著雙環(huán)醇濃度的增加(O.25mmol/L、O.5mmol/L、lmmol/L),

6、A490值(2.365士0.210、1.480士0.246、0.797士0.120)逐漸降低,與空白對(duì)照組(3.056土0.1lO)相比A490值明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);干預(yù)肝星狀細(xì)胞24h后,隨著濃度的增加,A490值(1.960士0.152、1.160a:0.143、0.65510.064)逐漸降低,與空白對(duì)照組(2.796士0.098)相比A490值明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P

7、895士0.105)逐漸降低,與空白對(duì)照組(3.279a:0.172)相比A490值明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P

8、。117,總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

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