本標(biāo)準(zhǔn)通過規(guī)范飼料中尿素含量的測定方法

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1、DB××/T××××—××××黑龍江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布1.1.1.1　××××-××-××實施××××-××-××發(fā)布飼料中尿素含量測定—分光光度法DB23/T××××—××××DB23黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS65.020.30B43備案號：黑質(zhì)技監(jiān)函發(fā)[2009J183號]1DB23/T××××—××××前言本標(biāo)準(zhǔn)通過規(guī)范飼料中尿素含量的測定方法，達(dá)到測定飼料中尿素含量，診斷動物尿素中毒的目的。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：徐世文、

2、李金龍、張春紅、李術(shù)、王偉IDB23/T××××—××××飼料中尿素含量測定技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物飼料中尿素含量的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于對動物飼料尿素中毒的診斷。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T14699.1—1993飼料采樣方法3原理利用尿素與對二甲氨基苯甲醛（DMAB）反應(yīng)，在酸性乙醇溶液中反應(yīng)，生成的黃色物質(zhì)最大吸收波長為420

3、nm，根據(jù)朗伯—比爾定律，計算樣品中尿素的含量。4儀器設(shè)備分光光度計：備有1cm和5cm比色杯。小型粉碎機。分析天平：感量0.1mg。振蕩器。容量瓶：25mL、100mL、500mL、1000mL。燒杯：100mL、200mL、500mL。微量移液器：量程1mL-5mL。移液管：10mL。長頸漏斗。5試劑和溶液5.1對二甲氨基苯甲醛溶液：DMAB（分析純）4.0000g，加10mL濃鹽酸（分析純），用無水乙醇（分析純）定容至100mL，密閉避光室溫保存。5.2乙酸鋅溶液：乙酸鋅[Zn(CH3COO)2·2H2O，分析

4、純]22.0000g，加入3mL冰乙酸（分析純），用蒸餾水定容至100mL。5.3亞鐵氰化鉀溶液：亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6·3H2O，分析純]10.6000g，加蒸餾水定容至100mL。5.4磷酸鹽緩沖液（pH7.0）：將3.403g無水KH3PO4（分析純）和4.355g無水K2HPO4（分析純）分別溶于100mL蒸餾水中，合并此溶液用蒸餾水定容至1L。5.5尿素標(biāo)準(zhǔn)溶液：a）儲備液：尿素的濃度為10mg/mL。準(zhǔn)確稱取5.0000（±0.0001）g尿素（分析純），用蒸餾水定容至500mL。b）工作液Ⅰ（尿

5、素的濃度為1.0mg/mL）：取10mL儲備液，用蒸餾水定容至100mL。3DB23/T××××—××××c）工作液Ⅱ（尿素的濃度為0.2mg/mL）：取10mL儲備液，用蒸餾水定容至50mL，再取此液10mL，用蒸餾水定容至100mL。5.6活性炭：化學(xué)純或分析純。6試驗樣品6.1飼料采樣方法：GB/T14699.1—19936.2樣品處理：精確稱取粉碎至20目左右的樣品m（±0.0001）g，置于錐形瓶中，加入1g活性炭，加蒸餾水約80mL，充分振蕩，分別加入5mL乙酸鋅溶液和5mL亞鐵氰化鉀溶液，用蒸餾水定容至

6、100mL，充分振蕩，并放置30min，用中速濾紙過濾，取濾液進(jìn)行試驗，同時做試劑空白。7標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制7.1樣品尿素含量在1％以下：分別取濃度為0.2mg/mL的尿素標(biāo)準(zhǔn)液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、7.00、10.00mL（即尿素標(biāo)準(zhǔn)液終濃度分別為0、0.08、0.016、0.024、0.032、0.04、0.056、0.08mg/mL），加入5mL磷酸鹽緩沖液，再加蒸餾水使總體積至18mL左右，然后分別加入5mLDMAB顯色液，用蒸餾水定容至25mL，搖勻，室溫下放置20min，以

7、磷酸鹽緩沖液為參比，在420nm波長下，將測定液和空白參比液用5cm比色池，測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，尿素含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出相關(guān)系數(shù)R2，要求R2>0.99。7.2樣品尿素含量在1％以上：分別將標(biāo)準(zhǔn)液濃度改為1.0mg/mL，比色池改為1cm，其他同7.1。8操作步驟取濾液估測尿素含量，當(dāng)樣品尿素含量在1％以下，取液量V為15mL，在1％以上取液量V為5mL，加入5mL磷酸鹽緩沖液，再加蒸餾水使總體積至18mL左右，然后分別加入5mLDMAB顯色液，用蒸餾水定容至25mL，搖勻，室溫下放置20min

8、，以不含樣品的濾液為試劑空白，在420nm波長下，將測定液和試劑空白液用5cm比色池，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上由吸光度查得尿素含量，通過計算，即得試樣的尿素含量C1和試劑空白的尿素含量C2。9結(jié)果計算樣品中尿素的含量計算公式：X=（C1-C2）mV11000××（C1-C2）mV100=×10mL×25mL100mL×1××25mL×式中：X——樣品中尿素