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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文野薔薇再生體系的建立及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究姓名：丁萌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：園林植物與觀賞園藝指導(dǎo)教師：寧國(guó)貴201206野薔薇再生體系的建立及遺傳轉(zhuǎn)化的研瓷野薔薇再生體系的建立及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究摘要野薔薇(RosamultifloraThunb．)又名多花薔薇，是薔薇科(Rosaceae)薔薇屬(Rosa)落葉木本植物，具有較高的觀賞價(jià)值和一定的藥用價(jià)值。野薔薇具有繁殖容易、生長(zhǎng)快、抗熱性強(qiáng)及觀賞價(jià)值高的特點(diǎn)，既可用作月季砧木，也可用作育種的親本。但野薔薇有些性狀，如花期短、皮刺多等，不適合用作砧木和親本，
2、需要利用植物基因工程進(jìn)行改良。本實(shí)驗(yàn)對(duì)華中地區(qū)四種野薔薇的再生和遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了系統(tǒng)研究。主要的研究結(jié)果如下：1．建立了野薔薇葉片不定芽直接再生體系以四種野薔薇葉片為外植體，研究了基因型、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、不同的外植體來源對(duì)其直接再生的影響，以篩選出不定芽誘導(dǎo)率最高的株系及最優(yōu)的誘導(dǎo)條件。研究結(jié)果表明：四種野薔薇的不定芽在1／2MS+0．05mg／LNAA+1．5mejLTDZ+10mg／LAgN03+3％Glucose+0．3％GEL的培養(yǎng)基上的誘導(dǎo)率差異顯著，野薔薇2號(hào)為78．20％，3號(hào)為61．16％，4號(hào)為13．00％，l號(hào)
3、僅5．93％；野薔薇2號(hào)的田問葉片外植體的不定芽誘導(dǎo)率高于組培苗葉片；基因型、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及葉片的狀態(tài)對(duì)野薔薇的直接再生影響顯著。2．建立了野薔薇體細(xì)胞胚發(fā)生途徑再生體系以四種野薔薇的葉片為外植體，研究了基因型、添加劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和培養(yǎng)條件對(duì)體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的影響。另外，以野薔薇2號(hào)和野薔薇4號(hào)的體細(xì)胞胚為外植體，研究了植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和培養(yǎng)條件對(duì)體細(xì)胞胚增殖、萌發(fā)的影響。以葉片為外植體進(jìn)行體細(xì)胞胚誘導(dǎo)時(shí)，4種不同基因型野薔薇的葉片均有體細(xì)胞胚發(fā)生。野薔薇1號(hào)和野薔薇4號(hào)在MS+5．0mg／L2,4-D+400mg／LL-p+1
4、0mg／LAgN03+3％Glucose+0．3％GEL的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率最高分別為4．38％、5．01％；野薔薇2號(hào)和野薔薇3號(hào)在MS+4．0mg／L2,4-D+400mg／LL—p+10mg／LAgN03+3％Glucose+0．3％GEL的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率最高分別為4．63％、2．78％。野薔薇2號(hào)體細(xì)胞胚在MS+I．0mg／L2，4．D+0．01mg／LBA+3％Glucose+0．3％GEL的培養(yǎng)基上增殖效果最好，增殖系數(shù)為4．15。野薔薇4號(hào)在MS+0．5mg／L2,4．D+0．005mg／LBA+3％Glucose+0
5、．3％GEL的培華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆碩士研究生學(xué)位論文養(yǎng)基上增殖效果最好，增殖系數(shù)為3．55。野薔薇2號(hào)體細(xì)胞胚在MS+0．5mg／LBA+1．0mg／LTDZ+3％Glucose+0．3％GEL的萌發(fā)培養(yǎng)基上萌發(fā)率最高為91．67％，野薔薇4號(hào)MS+0．5mg／LBA+1．0mg／LTDZ+3％Glucose+0．3％GEL的萌發(fā)培養(yǎng)基上萌發(fā)率最高為83．33％。3．初步建立了野薔薇的遺傳轉(zhuǎn)化體系以體細(xì)胞胚為外植體，研究了卡那霉素和潮霉素兩種抗生素對(duì)野薔薇2號(hào)體細(xì)胞胚增殖的影響。結(jié)果表明，在含120mg／LKm的培養(yǎng)基上培養(yǎng)
6、一個(gè)月，60．18％的體細(xì)胞胚褐化死亡；在含80mg／LHyg的培養(yǎng)基上培養(yǎng)一個(gè)月，93．30％的體細(xì)胞胚褐化死亡。以體細(xì)胞胚為外植體，研究了潮霉素對(duì)野薔薇4號(hào)體細(xì)胞胚增殖的影響，在含70mg／LHyg的培養(yǎng)基上培養(yǎng)一個(gè)月，66．76％的體細(xì)胞胚褐化死亡。分別以野薔薇2號(hào)、4號(hào)體細(xì)胞胚作為農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的受體，設(shè)定不同的侵染時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間，統(tǒng)計(jì)并分析共培養(yǎng)后GUS基因瞬間表達(dá)率的結(jié)果表明：野薔薇2號(hào)體細(xì)胞胚侵染40min，共培養(yǎng)3d，GUS瞬間表達(dá)率最高達(dá)到65．30％；野薔薇2號(hào)體細(xì)胞胚侵染40min，共培養(yǎng)3d，在MS
7、+I．0m．g／L2,4．D+300mg／LCef+50mg／LHyg+3％Glucose+0．3％GEL的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)一個(gè)月后，GUS穩(wěn)定表達(dá)的體細(xì)胞胚約占6．52％。野薔薇4號(hào)體細(xì)胞胚侵染40min，共培養(yǎng)5d，GUS瞬間表達(dá)率最高達(dá)到69．51％1野薔薇4號(hào)體細(xì)胞胚侵染40min，共培養(yǎng)5d；在MS+I．0mg／L2，4一D+300mg／LCef+50mg／LHyg+3％Glucose+0．3％GEL的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)一個(gè)月后，GUS穩(wěn)定表達(dá)的體細(xì)胞胚約占7．32％。關(guān)鍵詞：野薔薇；小葉片；直接再生；體細(xì)胞胚；遺傳轉(zhuǎn)化
8、野薔薇再生體系的建立及遺傳轉(zhuǎn)化的研究EstablishmentofdifferentregenerationsystemandgenetictransformationinRosamultifloraAbstractRosamultifloraThunb．，、Ⅳ
