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1、布拉氏酵母菌表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用研究表明，pSDSb和pSDSc兩種表面展示質(zhì)粒對(duì)外源蛋白的展示效率差異不顯著(P=O．974)。(二)穩(wěn)定表達(dá)表面展示系統(tǒng)：1．穩(wěn)定表達(dá)表面展示質(zhì)粒的構(gòu)建：破壞瞬時(shí)表達(dá)表面展示質(zhì)粒上的2-micronorigin元件，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)表面展示質(zhì)粒pLSDSb和pLSDSb2。2．利用EGFP蛋白作為報(bào)告蛋白，鑒定穩(wěn)定表達(dá)表面展示系統(tǒng)的可用性：將EGFP基因克隆到pLSDSb、pLSDSb2質(zhì)粒上的AGA2基因表達(dá)盒內(nèi)，構(gòu)建EGFP表面展示質(zhì)粒。熒光分析和Westernblot結(jié)果表明，EGFP蛋白能夠展示在布拉氏酵母菌細(xì)胞表面。
2、(三)布拉氏酵母菌表面展示系統(tǒng)的應(yīng)用研究1．瞬時(shí)表達(dá)與穩(wěn)定表達(dá)表面展示系統(tǒng)對(duì)EGFP蛋白展示效率的比較：利用熒光、流式分析比較兩種表面展示系統(tǒng)對(duì)EGFP的展示效率，熒光結(jié)果表明：在培養(yǎng)24h時(shí)，瞬時(shí)表達(dá)表面展示系統(tǒng)可將EGFP展示在酵母細(xì)胞表面，培養(yǎng)120h后，熒光逐漸消失；與瞬時(shí)表達(dá)表面展示系統(tǒng)不同，在培養(yǎng)36h時(shí)，穩(wěn)定表達(dá)表面展示系統(tǒng)可將EGFP展示在酵母細(xì)胞表面，只要培養(yǎng)酵母細(xì)胞，外源蛋白可一直表達(dá)。流式結(jié)果表明：pSDSb—GFP的展示效率為87．89％，pLSDSb．GFP的展示效率為92．34％，pLSDSb2．GFP的展示效率為92．45％，說明穩(wěn)
3、定表達(dá)表面展示系統(tǒng)的展示效率稍高于瞬時(shí)表達(dá)表面展示系統(tǒng)。2．將雞柔嫩艾美耳球蟲微線蛋白。2(EtMic2)基因克隆到pSDSb、pSDSb2質(zhì)粒上，構(gòu)建EtMic2瞬時(shí)表達(dá)表面展示質(zhì)粒；通過間接免疫熒光分析可知，在培養(yǎng)12h時(shí)，EtMic2即可展示在酵母細(xì)胞表面。關(guān)鍵詞：布拉氏酵母菌；酵母表面展示；a一凝集素；EGFP；雞柔嫩艾美耳球蟲微線蛋白一2n山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文TheEstabfishmentandAppficationofSaccharomycesboulardiiSurfaceDisplaySystemAbstractSaccharomycesb
4、oulardii@boulardii)isanon-pathogenicprobioticyeastisolatedfromIndonesialycheeandotherfruithasantibacterial，resistthepoisonofdiarrhoea,maintainthehostgastrointestinaltractmicro—ecologicalbalance，andimprovethebodynonspecificimmunity．MostresearchesofS．boulardiihavebeenfocmedontheclinica
5、lapplication，themechanismofSboulardii，particularlythemechanismandgeneticmanipulationsofS．boulardiihasfewstudiesandreports．SincethefirstdevelopmentofacellsurfacedisplaysystemonabacteriophagebySmith,therehasbeensubstantialprogressincellsurfacedisplaytechnologies．Yeastisaeukaryoticorgan
6、ismthatissimilartohighereukaryotesinpost-translationalprocessing，yeastsurfacedisplaysystemhasbecomeanidealsurfacedisplaysystemforeukaryoticpathogens．Usingtheprobioticsurfacedisplaysystemasalivevaccinevectorisoneoftheimportantapplicationsinmedicineandveterinarysciencefield，Saccharomyc
7、escerevisiae假cerevisiae)andLactobacillushasbeenusedasaplatformforlivevaccine．Asoneofthemostvaluableprobiotics，theSboulardiihasneverbeenreportedpreviouslyasthehostofasurfacedisplaysystem．Inthisstudy,ana-agglutininWasusedtoconstructthe＆boulardiisurfacedisplaysystems(thetransientexpress
8、ionandstable
