自然殺傷細(xì)胞及其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)隱球菌感染影響及相關(guān)機(jī)制研究

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1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文自然殺傷細(xì)胞及其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)隱球菌感染影響及相關(guān)機(jī)制研究姓名：徐斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：張繼明2012-04-03復(fù)旦大學(xué)博士論文中文摘要第—部分自然殺傷細(xì)胞在隱球菌摩染中的變化及其對(duì)隱球菌摩染病程的影響一、小鼠肺隱球菌感染模型以及NK細(xì)胞耗竭(NKcelldepletedmicemodel)小鼠模型的建立目的建立小鼠肺隱球菌感染模型以及NK細(xì)胞耗竭小鼠模型方法C57BI．／6小鼠經(jīng)腹腔注射2．s％Avertin麻醉后，于小鼠一側(cè)鼻孔內(nèi)緩慢滴入已調(diào)整濃度的

2、菌液(接種量lxl06／tJ、鼠)。對(duì)照組小鼠經(jīng)小鼠一側(cè)鼻孔緩慢滴入無(wú)菌PBS，觀察小鼠肺部病變、病理變化、臟器真菌載量。同時(shí)，C57BL／6小鼠予以腹腔注射anti．NKl．1單抗腹水(150¨L／小鼠)，觀察小鼠脾細(xì)胞中NK細(xì)胞的變化。結(jié)果經(jīng)鼻腔滴入隱球菌液后，小鼠肺部可見肉眼病灶，肺病理切片中可觀察到酵母菌，肺組織勻漿培養(yǎng)可見隱球菌菌落形成。小鼠經(jīng)anti．NKl．1單抗腹水處理后2天，脾細(xì)胞中、NK細(xì)胞的比例明顯下降(>90％)，效果可持續(xù)10天以上。結(jié)論通過經(jīng)鼻滴入隱球菌液建立了小鼠肺

3、隱球菌感染模型，經(jīng)腹腔注射anti．NKl．1單抗建立NK細(xì)胞耗竭小鼠模型。復(fù)旦大學(xué)博士論文二、隱球菌感染時(shí)體內(nèi)自然殺傷細(xì)胞數(shù)量和功能變化的時(shí)相特征以及對(duì)于隱球菌感染病程的影響目的系統(tǒng)探討隱球菌感染后感染灶局部和全身NK細(xì)胞數(shù)量和功能變化的時(shí)相特征，以及對(duì)于主要臟器的真菌載量和小鼠生存率的影響方法使用小鼠肺隱球菌感染模型和NK細(xì)胞耗竭小鼠模型，將小鼠分為anti．NKl．1未處理和處理組，觀察感染后第1、3、7、14天小鼠肺部及脾臟內(nèi)NK細(xì)胞數(shù)量、活化狀態(tài)、脫顆粒情況，觀察感染后第1、3、7、1

4、0、14天小鼠肺部和腦部真菌載量變化，觀察小鼠生存曲線的變化。結(jié)果隱球菌感染后小鼠脾細(xì)胞總數(shù)、脾細(xì)胞中NK細(xì)胞數(shù)量、肺間質(zhì)白細(xì)胞總數(shù)、肺間質(zhì)白細(xì)胞中NK細(xì)胞數(shù)量均明顯增加，而小鼠體內(nèi)NK細(xì)胞耗竭對(duì)于脾細(xì)胞總數(shù)無(wú)明顯影響，但可顯著影響感染第7天時(shí)肺間質(zhì)白細(xì)胞總數(shù)(P

5、真菌載量在感染早期逐漸增加，感染后10天至14天最為明顯，其后有逐漸下降趨勢(shì)，而anti．NKl．1處理小鼠則隨感染時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增加，兩組小鼠在感染第3天、第14天、第28天有顯著差異(PO．05)。與anti．NKl．1未處理組小鼠相比，anti．NKl．1處理組的小鼠死亡出現(xiàn)更早且死亡比例更高，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=O．0007)。結(jié)論隱球菌感染時(shí)，感染小鼠肺部和全身NK細(xì)胞數(shù)量明顯增加，

6、NK細(xì)胞耗竭可影響肺部間質(zhì)白細(xì)胞總數(shù)。小鼠肺部隱球菌感染后，小鼠NK細(xì)胞均可被活化，NK細(xì)胞脫顆粒能力增強(qiáng)，且在感染后第3天時(shí)最為明顯。小鼠體內(nèi)NK細(xì)胞耗竭后可顯著增加感染早期和后期肺部真菌載量，但對(duì)腦部真菌載量無(wú)影響。體內(nèi)NK細(xì)胞耗竭后可顯著影響隱球菌感染小鼠的生存曲線。復(fù)旦大學(xué)博士論文第二部分自然殺傷細(xì)胞在隱球菌摩染中的免疫調(diào)節(jié)作用及其可能機(jī)制一、自然殺傷細(xì)胞在隱球菌感染時(shí)對(duì)適應(yīng)性免疫的影響目的研究小鼠隱球菌感染時(shí)NK細(xì)胞對(duì)機(jī)體適應(yīng)性免疫反應(yīng)的影響。方法使用小鼠肺隱球菌感染模型和NK細(xì)胞耗竭

7、小鼠模型，將小鼠分為anti—NKl．1未處理和處理組，檢測(cè)小鼠感染后第7天、第14天時(shí)肺間質(zhì)白細(xì)胞中CD4*T細(xì)胞內(nèi)IFNy、IL一4分泌情況，測(cè)定小鼠感染后第7天、第14天時(shí)肺組織勻漿中IFNy、IL-4的水平。結(jié)果小鼠肺隱球菌感染后第7天和第14天，肺間質(zhì)白細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞胞內(nèi)IFNy分泌均顯著增加(P

8、胞IFNy分泌較未處理小鼠顯著減少，而且在感染第14天時(shí)較感染后第7天時(shí)無(wú)明顯增加，小鼠肺間質(zhì)白細(xì)胞中CD4*T細(xì)胞IL-4分泌則逐漸增加。小鼠肺隱球菌感染后第7天和第14天，肺組織勻漿中IFNy水平均顯著增加，呈逐漸上升趨勢(shì)，而NK細(xì)胞體內(nèi)耗竭后，增加程度顯著下降(P