幾種微生態(tài)制劑對刺參(apostichopus japonicus)養(yǎng)殖水體及刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

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1、中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文幾種微生態(tài)制劑對刺參（Apostichopusjaponicus）養(yǎng)殖水體及刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響姓名：陽鋼申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師：田相利201206幾種微生態(tài)制劑對刺參(卻Dsffc^叩“s_，印Dnic”s)養(yǎng)殖水體及刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響幾種微生態(tài)制劑對刺參(卻儺如^叩船歹印D刀記淞)養(yǎng)殖水體及刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響摘要刺參(彳pDsffc辦Dp”J7印Dn七甜s)屬于棘皮動物門(Echinodemata)、海參綱(HoIothroidea)，是我國北方經(jīng)濟(jì)效益較高的、重要增養(yǎng)殖種類。201

2、0年我國刺參養(yǎng)殖面積達(dá)到】5．5萬公頃，產(chǎn)量達(dá)到13．02萬噸，產(chǎn)值超過200億元，刺參養(yǎng)殖業(yè)已成為我國海水養(yǎng)殖的重要的特色支柱產(chǎn)業(yè)。目前在刺參的育苗、保苗和養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐中，微生態(tài)制劑得到廣泛的應(yīng)用，也獲得了養(yǎng)殖者的普遍認(rèn)可。然而，人們對關(guān)于其作用機(jī)制至今仍了解不多。現(xiàn)有的研究也多集中于其對水質(zhì)改善的效果、對養(yǎng)殖動物消化功能、免疫力以及生長等指標(biāo)影響等方面，關(guān)于微生態(tài)制劑對刺參體內(nèi)外環(huán)境中菌群結(jié)構(gòu)的影響，卻還鮮見報道。本研究將傳統(tǒng)培養(yǎng)方法和DGGE指紋圖譜技術(shù)相結(jié)合，研究了不同微生態(tài)制劑對刺參養(yǎng)殖水體和刺參腸道內(nèi)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)組成變化的影響

3、，以期為微生態(tài)制劑在刺參養(yǎng)殖的中合理使用以及相關(guān)作用機(jī)制研究提供理論依據(jù)。所獲得研究結(jié)果如下：1．蠟樣芽孢桿菌BC．1水體潑灑對刺參養(yǎng)殖水體、腸道細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)以及刺參生長的影響通過傳統(tǒng)培養(yǎng)與PCR．DGGE相結(jié)合，研究了潑灑一株蠟樣芽孢桿菌(肋cf刀淞cP坨甜J)對刺參生長和養(yǎng)殖水體和腸道中菌群結(jié)構(gòu)的影響。蠟樣芽孢桿菌潑灑濃度分別為106、108、1010c糾m3(分別命名為Bc6、BC8和BCl0)，每7d全量換水1次，以未潑灑芽孢桿菌制劑處理為對照2(CT2)。另外設(shè)置每隔3d全量換水1次的不潑灑芽孢桿菌制劑的處理做為對照組1(CTl

4、)。8周的養(yǎng)殖實驗表明，BC6和BC8處理組刺參特定生長率則顯著高于其它處理(P<0．05)，刺參個體差異也低于對照組。經(jīng)傳統(tǒng)2216E培養(yǎng)基涂布培養(yǎng)分離發(fā)現(xiàn)，蠟樣芽孢桿菌潑灑第3d時，3個處理組水體樣品中出現(xiàn)了蠟樣芽孢桿菌菌落，但第7d時芽孢桿菌菌落均消失；實驗結(jié)束后，取刺參腸道糞便樣品涂布培養(yǎng)，3個處理組均出現(xiàn)了蠟樣芽孢桿菌菌落。PCR—DGGE技術(shù)分析表明，刺參養(yǎng)殖水體中的優(yōu)勢菌群歸幾種微生態(tài)制劑對刺參(卻∞，七向印“s_『qpD”七“s)養(yǎng)殖水體及刺參腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響屬于C【．變形菌綱(0【．Proteobacteria)、1，

5、一變形菌綱(丫．Proteobacteria)、6一變形菌綱(6一Proteobacteria)、黃桿菌綱(Flavobacteria)、擬桿菌綱(Bacteroidetes)和疣微菌綱(Venucomicrobiae)，而芽孢桿菌綱(Bacilli)細(xì)菌在水體中未能形成優(yōu)勢菌群。刺參腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌群歸屬于0【．變形菌綱、Y．變形菌綱、￡．變形菌綱(￡一Proteobacteria)、黃桿菌綱、擬桿菌綱和芽孢桿菌綱。施用蠟樣芽孢桿菌顯著改變了刺參腸道的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)，以對照組CT2為參照，刺參腸道內(nèi)過路菌群中的黃桿菌綱和擬桿菌綱的相對含量有

6、明顯下降，而芽孢桿菌綱細(xì)菌則在刺參腸道過路茵群中形成了占一定比例的細(xì)菌群落，并在BC6處理組中成為優(yōu)勢菌群，其相對含量為23．3％；使刺參腸道固定菌群中一株占有主導(dǎo)的丫．變形菌綱消失。本研究表明，水體中潑灑該芽孢桿菌制劑對水體和刺參腸道內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)和豐度均具有顯著影響，在適宜的潑灑濃度下可以有效提高刺參的生長速度、降低刺參生長的個體差異。2．復(fù)合微生態(tài)制劑水體潑灑對刺參養(yǎng)殖水體、腸道茵群結(jié)構(gòu)以及刺參生長的影響通過傳統(tǒng)培養(yǎng)與PCR．DGGE相結(jié)合，研究了潑灑復(fù)合芽孢桿菌制劑對刺參生長和養(yǎng)殖水體和腸道中菌群結(jié)構(gòu)的影響。復(fù)合芽孢桿菌制劑由由枯草芽

7、孢桿菌(B口cf刀螂J“6rf凰)、蠟樣芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌(B日cfff娜，fc乃P，z扣冊括)按一定比例復(fù)配制作而成，其潑灑濃度分別為106、108、1010c如／m3(分別命名為WSR6、WSR8和WSRlO)，每7d全量換水1次，以未潑灑芽孢桿菌制劑處理為對照2(CT2)。另外設(shè)置每隔3d全量換水1次的不潑灑芽孢桿菌制劑的處理做為對照組1(CTl)。8周的養(yǎng)殖實驗表明，WSR6和wSRl0處理組刺參特定生長率則顯著高于其它處理，刺參個體差異則顯著低于對照組(尸<0．05)。經(jīng)傳統(tǒng)2216E培養(yǎng)基涂布培養(yǎng)分離發(fā)現(xiàn)，復(fù)合微生態(tài)制劑潑

8、灑第3d時，僅WSRlO處理組水體樣品出現(xiàn)蠟樣芽孢桿菌菌落，但第7d時該處理組芽孢桿菌菌落消失：實驗結(jié)束后，取刺參腸道糞便樣品涂布培養(yǎng)，3個處理組均出現(xiàn)了蠟樣芽孢桿菌菌落。PCR．DGGE技術(shù)