環(huán)境雌激素壬基酚對(duì)仔鼠神經(jīng)發(fā)育毒性及機(jī)制研究

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1、重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文環(huán)境雌激素壬基酚對(duì)仔鼠神經(jīng)發(fā)育毒性及機(jī)制研究姓名：許潔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：汪洋201205重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文環(huán)境雌激素壬基酚對(duì)仔鼠神經(jīng)發(fā)育毒性及機(jī)制研究摘要壬基酚(Nonylphenol，NP)是環(huán)境雌激素樣化學(xué)物的典型代表，作為乳化劑廣泛應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、日用品生產(chǎn)中，可由污水排入水體環(huán)境。NP在環(huán)境中難于降解，具有高度脂溶性和生物蓄積性，可經(jīng)口腔、呼吸道、皮膚等多種途徑進(jìn)入機(jī)體，對(duì)人群健康產(chǎn)生危害。研究估計(jì)，非職業(yè)暴露人群通過各種途徑接受NP的暴露水平為3．6"---31．4tag／kg／da

2、y。體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)顯示NP的雌激素活性約為雌二醇的104，---10‘5倍，可模擬雌激素與機(jī)體內(nèi)多組織器官的雌激素受體結(jié)合發(fā)揮雌激素樣作用，目前較多關(guān)于NP生殖和發(fā)育毒性的研究表明，NP的毒性機(jī)制主要源于其對(duì)內(nèi)分泌的干擾作用，可對(duì)魚類、兩棲動(dòng)物及哺乳動(dòng)物多種器官產(chǎn)生不良作用：包括影響生殖、內(nèi)分泌、免疫、消化、泌尿等系統(tǒng)的功能，然而NP對(duì)子代神經(jīng)行為發(fā)育的影響目前尚不清楚。中樞神經(jīng)系統(tǒng)在發(fā)育時(shí)期對(duì)體內(nèi)多種激索水平的變化非常敏感，相對(duì)成人而言，胎兒在胚胎中后期和哺乳期，血腦屏障未發(fā)育成熟，中樞神經(jīng)系統(tǒng)正值器官形成期，此時(shí)期最易受外來毒物損害，其神經(jīng)系統(tǒng)器官發(fā)育和功能

3、很可能受到影響。因此，若機(jī)體此期間若暴露于內(nèi)分泌干擾物NP，可能導(dǎo)致胎兒神經(jīng)系統(tǒng)所受的損害會(huì)比其它時(shí)期更為嚴(yán)重。以往研究大多是多種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Environmental重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文EndocrineDisrupters，EEDs)的聯(lián)合暴露，不能說明NP單獨(dú)的毒性作用，得出的結(jié)果也各不相同，因此結(jié)論尚具有不確定性，對(duì)機(jī)理的研究較片面，缺乏深入而系統(tǒng)的研究。本課題以大鼠為研究對(duì)象，首次在神經(jīng)系統(tǒng)胚胎發(fā)育敏感期暴露NP，觀察NP對(duì)仔鼠神經(jīng)行為發(fā)育的影響，測(cè)試其學(xué)習(xí)記憶能力的變化，并從細(xì)胞凋亡、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、膠質(zhì)細(xì)胞纖維酸性蛋白、信號(hào)傳遞等角

4、度進(jìn)行研究，同時(shí)利用基因芯片從分子水平嘗試探討NP神經(jīng)毒性的分子機(jī)制，進(jìn)而可為NP在發(fā)育期間暴露的危害評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為制定相關(guān)環(huán)境污染標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)。第一部分NP對(duì)母鼠生殖和仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響目的：研究NP對(duì)雌性大鼠生產(chǎn)和仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響。方法：SD孕鼠28只隨機(jī)分為4組(對(duì)照組、50mg／kgNP、100mg／kgNP、200mg／kgNP)，每組6～7只，妊娠第9415天灌胃NP，觀察孕鼠的體重、進(jìn)食、染毒后的一般情況以及生殖情況，觀察仔鼠的出生指標(biāo)及體重變化，檢測(cè)仔鼠早期生理發(fā)育指標(biāo)。結(jié)果：(1)各實(shí)驗(yàn)組孕鼠末見明顯中毒癥狀，100mg／kg(中

5、劑量組)和200mg／kg(高劑量組)NP組孕鼠每窩平均胎數(shù)、活胎數(shù)降低，死胎數(shù)增加，p<0．05。(2)高劑量組仔鼠身長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、肛殖距縮短，P<0．05。(3)各實(shí)驗(yàn)組仔鼠出生臟器重量(腦，肝、腎、心等)與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p>0．05。(4)高劑量組體重出生后1、7、14、21、28天均低于對(duì)照組，p<0．01。(5)高劑量組仔鼠早期生理發(fā)氣重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文育指標(biāo)(張耳、開眼、長(zhǎng)毛、出牙)發(fā)育時(shí)間較對(duì)照組延長(zhǎng)，p<0．05。以上指標(biāo)低劑量組與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p>O．05。結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)的染毒方式、時(shí)間和劑量下，高劑量組

6、NP對(duì)雌鼠的生殖能力有影響，同時(shí)可影響仔鼠的出生指標(biāo)和生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)。第二部分NP對(duì)仔鼠神經(jīng)行為發(fā)育的影響目的：探討母鼠NP孕期暴露致子代神經(jīng)行為發(fā)育及學(xué)習(xí)記憶的影響。方法：孕鼠染毒及分組方法同第一部分。在出生后特定的時(shí)間，觀察仔鼠斷崖回避、平面翻正、前肢懸掛、空中翻正、聽覺驚愕和視覺定位等早期神經(jīng)行為發(fā)育指標(biāo)，選擇8周齡仔鼠進(jìn)行Moms水迷宮和跳臺(tái)試驗(yàn)，檢測(cè)NP對(duì)其學(xué)習(xí)記憶的影響；脫椎取腦組織做石蠟切片HE染色光鏡下觀察其病理變化；海馬組織透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果：(1)早期神經(jīng)行為發(fā)育指標(biāo)：高劑量組仔鼠(斷崖回避、平面翻正、前肢懸掛、空中翻正、聽覺驚愕

7、和視覺定位等)時(shí)間較對(duì)照組延長(zhǎng)(p<0．05)；(2)Moms水迷宮試驗(yàn)：高劑量組仔鼠水迷宮中逃避潛伏期延長(zhǎng)@

8、狀況，篩選部分與神經(jīng)毒性相關(guān)的差異表達(dá)