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《生物檢測二十八基因工程與克隆技術(shù)課前診斷卷.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、檢測（二十八）“基因工程與克隆技術(shù)”課前診斷卷考點一基因工程與蛋白質(zhì)工程1.(2018屆高三·青島市質(zhì)量檢測)科學(xué)家運用基因工程技術(shù)將結(jié)核桿菌MPT64基因(能控制合成MPT64蛋白)成功導(dǎo)入胡蘿卜細(xì)胞，最終表達(dá)出肺結(jié)核疫苗。請回答下列問題：(1)為獲取MPT64基因，可從結(jié)核桿菌的細(xì)胞中提取對應(yīng)mRNA，在________________的作用下合成雙鏈cDNA片段，獲得的cDNA片段與結(jié)核桿菌中該基因堿基序列______________(填“相同”或“不同”)。(2)通常采用PCR技術(shù)擴(kuò)增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，
2、以便根據(jù)這一序列合成______________，在操作步驟中需要加熱至90～95℃的目的是________________________________________________________________________。(3)根據(jù)農(nóng)桿菌的特點，如果將MPT64基因插入到_______________上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入胡蘿卜細(xì)胞，并將其插入到植物細(xì)胞中的______________上。要確認(rèn)MPT64基因是否在胡蘿卜植株中表達(dá)，應(yīng)檢測胡蘿卜植株中是否含有_____________________________
3、___________________________________________。(4)研究發(fā)現(xiàn)，如果將MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改變?yōu)榘腚装彼?，其保存時間將大大延長，科學(xué)家可以生產(chǎn)上述耐儲存的MPT64蛋白的現(xiàn)代生物工程技術(shù)是________________________________。解析：(1)以mRNA為模板合成cDNA的過程是逆轉(zhuǎn)錄，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。由于DNA轉(zhuǎn)錄形成的mRNA過程中非編碼序列不轉(zhuǎn)錄，所以形成的cDNA與結(jié)核桿菌中該基因堿基序列不同。(2)在PCR技術(shù)中，以已知一段MPT64基因的核苷酸序列為模板，合成引
4、物。在操作步驟中需要加熱至90～95℃，以打開DNA的雙鏈。(3)在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中，將MPT64基因插入到農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒的TDNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入胡蘿卜細(xì)胞，并將其插入到植物細(xì)胞中的染色體的DNA上。基因的表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，要確認(rèn)MPT64基因是否在胡蘿卜植株中表達(dá)，應(yīng)檢測胡蘿卜植株中是否含有MPT64蛋白。(4)利用蛋白質(zhì)工程可以通過設(shè)計改造原有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。答案：(1)逆轉(zhuǎn)錄酶 不同 (2)引物 目的基因DNA受熱變性解鏈為單鏈 (3)Ti質(zhì)粒的TDNA 染色體的DNA MPT64蛋白 (4)蛋白質(zhì)工程2．(20
5、17·衡水模擬)油菜中油酸為不飽和脂肪酸，能降低人體血液的膽固醇含量，減少人體患心血管病的風(fēng)險。F基因控制合成的油酸酯氫酶催化油酸形成飽和脂肪酸，轉(zhuǎn)反義F基因油菜能提高菜籽油的油酸含量。請分析回答下列問題：(1)從油菜細(xì)胞的染色體DNA獲取F基因后進(jìn)行大量擴(kuò)增的方法為___________。(2)構(gòu)建反義F基因表達(dá)載體時，需要用到的工具酶有_____________________；農(nóng)桿菌可用來將反義F基因表達(dá)載體導(dǎo)入油菜細(xì)胞，從分子角度分析，其具有的特點是______________________________________________。構(gòu)建
6、反義F基因表達(dá)載體時沒有設(shè)計標(biāo)記基因，其可能的原因是_______________________________________________。(3)Le啟動子為種子特異性啟動子，將F基因反向連接在Le啟動子之后構(gòu)建了反義F基因。檢測轉(zhuǎn)反義F基因油菜細(xì)胞內(nèi)F基因轉(zhuǎn)錄的mRNA含量，結(jié)果表明，因雜交形成雙鏈RNA，細(xì)胞內(nèi)F基因的mRNA水平下降。由此推測，反義F基因的轉(zhuǎn)錄抑制了F基因的________(填“復(fù)制”“轉(zhuǎn)錄”或“翻譯”)過程。若F基因轉(zhuǎn)錄時，兩條單鏈(a1、a2)中a1為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，則反義F基因轉(zhuǎn)錄時的模板鏈為__________。解析：
7、(1)PCR技術(shù)是一種體外擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，其次還需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子；因農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，故農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法為常用的將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法；標(biāo)記基因表達(dá)產(chǎn)物，可能會對食品安全構(gòu)成威脅，所以構(gòu)建反義F基因表達(dá)載體時沒有設(shè)計標(biāo)志基因，這樣不會產(chǎn)生標(biāo)記基因表達(dá)產(chǎn)物，有利于食品安全。(3)mRNA是翻譯的模板，轉(zhuǎn)反義F基因油菜細(xì)胞內(nèi)F基因轉(zhuǎn)錄的mRNA含量下降，可見反義F
8、基因的轉(zhuǎn)錄抑制了F基因的翻譯過程。F基因轉(zhuǎn)錄形成的RNA能與反義F基因轉(zhuǎn)錄形成的
