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1、花色相關(guān)基因的克隆鑒定及蘭花遺傳轉(zhuǎn)化研究陳潔201屆2碩士中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院萬方數(shù)據(jù)分類號(hào)S682.31密級(jí)公開UDC學(xué)位論文花色相關(guān)基因的克隆鑒定及蘭花遺傳轉(zhuǎn)化研究Studyoncloningandidentificationofgenesrelatedtoflowercolorandgenetictransformationoforchid陳潔指導(dǎo)教師姓名李潞濱研究員申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱園林植物與觀賞園藝研究方向植物細(xì)胞與基因工程論文提交日期2012年5月論文答辯日期2012年6月學(xué)位授予日期2012年7月答辯委員會(huì)主席評(píng)
2、閱人北京·中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文花色相關(guān)基因的克隆鑒定及蘭花遺傳轉(zhuǎn)化研究學(xué)位論文作者陳潔指導(dǎo)教師姓名李潞濱研究員指導(dǎo)小組成員楊凱副教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱園林植物與觀賞園藝研究方向植物細(xì)胞與基因工程論文答辯日期2012年6月中國(guó)·北京萬方數(shù)據(jù)DissertationfortheDegreeCloningandanalysisofgenesrelatedtoflowercolorandgenetictransformationoforchidCandidate:ChenJieSupervisor:Prof.LiLub
3、inAssociateSupervisor:AssociateProf.YangKaiAcademicDegreeAppliedfor:MasterSpeciality:OrnamentalPlantsandHorticultureDateofDefence:June2012Degree-Conferring-Institution:ChineseAcademyofForestry萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含
4、其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得本研究生培養(yǎng)單位或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（
5、保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：年月日年月日學(xué)位論文作者畢業(yè)聯(lián)系方式工作單位：聯(lián)系電話：15210926652電子郵件：chenjiexue@126.com通訊地址、郵編：萬方數(shù)據(jù)摘要園林植物的花色直接影響其觀賞價(jià)值。蘭花是花卉產(chǎn)業(yè)中價(jià)值最高的種類之一，其花色的改良在蘭花育種工作中一直備受關(guān)注。然而，由于蘭花生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、自然結(jié)實(shí)率低等原因，傳統(tǒng)的育種周期較長(zhǎng)。利用轉(zhuǎn)基因手段進(jìn)行蘭花育種可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)育種的缺陷，具有較好的發(fā)展前景。本研究旨在通過對(duì)花色相關(guān)基因的克隆與功能鑒定，獲得具有育種價(jià)值的花色相關(guān)
6、基因，用于蘭花遺傳轉(zhuǎn)化，為通過轉(zhuǎn)基因途徑培育花色豐富的蘭花新種質(zhì)資源提供科學(xué)依據(jù)。本研究利用巢式PCR與PCR的方法從非洲堇與矮牽牛中克隆了花色形成過程中相關(guān)酶的基因，并將這些基因構(gòu)建到植物表達(dá)載體上，通過轉(zhuǎn)化模式植物對(duì)其進(jìn)行了功能鑒定，隨后進(jìn)行了蘭花轉(zhuǎn)基因育種的初步研究。具體結(jié)果如下：1.從非洲堇中克隆出類黃酮3’5’-羥基化酶（flavonoid3’,5’-hydroxylase,F3’5’H）基因。該基因序列全長(zhǎng)為1612bp，編碼508個(gè)氨基酸；包含兩個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子，在894bp與980bp之間有一個(gè)長(zhǎng)85bp的內(nèi)含
7、子。在GeneBank上提交該序列，序列登錄號(hào)為JF261509。2.從矮牽牛中克隆出二羥黃酮還原酶（dihydroflavonol-4-reductase,DFR）基因。該基因序列全長(zhǎng)為1122bp，編碼373個(gè)氨基酸，與NCBI上登錄號(hào)為（AF233639）的矮牽牛（Petunia×hybrida）DFR基因序列相似度為100%。3.從矮牽牛中克隆出查爾酮異構(gòu)酶（chalconeisomerase,CHI）基因。該基因序列全長(zhǎng)為653bp，編碼210個(gè)氨基酸，與登錄號(hào)為（AB543054）的矮牽牛CHI基因序列相似度為100%
8、。4.構(gòu)建了查爾酮合成酶（chalconesynthase,CHS）基因的pCAMBIA1304-senseCHS、pCAMBIA1304-antiCHS表達(dá)載體以及F3’5’H基因的pCAMBIA1304-F3’5’H表達(dá)載體。將表達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
