資源描述：
《馬鈴薯早疫病菌(alternaria alternata)對(duì)異菌脲和咯菌腈的抗性風(fēng)險(xiǎn)及分子機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文馬鈴薯早疫病菌（Alternariaalternata）對(duì)異菌脲和咯菌腈的抗性風(fēng)險(xiǎn)及分子機(jī)制研究姓名：范子耀申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)藥學(xué)指導(dǎo)教師：王文橋；劉穎超20120522摘要本論文采用真菌傳統(tǒng)鑒定方法與分子生物學(xué)技術(shù)鑒定了河北省馬鈴薯早疫病病原菌種類，并采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了采自河北省馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)的早疫病菌對(duì)異菌脲和咯菌腈的敏感性，分別建立了早疫病菌對(duì)異菌脲和咯菌腈的敏感基線，評(píng)估了馬鈴薯早疫病菌對(duì)異菌脲和咯菌腈的抗性風(fēng)險(xiǎn)，并開展了抗性分子機(jī)制的研究。1馬鈴薯早疫病病原菌鑒定2009—2011年從河北省5個(gè)縣采集180個(gè)早疫病菌標(biāo)樣，以常規(guī)方法進(jìn)行分離及純化，
2、根據(jù)病原菌的形態(tài)特征和致病性，結(jié)合其rDNA—ITS區(qū)域的序列分析對(duì)病原菌進(jìn)行鑒定。共分離到兩種菌(A、B)，分離比例為4：6；致病性試驗(yàn)證實(shí)分離菌A和B均為馬鈴薯早疫病病原菌，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定，初步認(rèn)定A為茄鏈格孢■lternariasolani)，B為鏈格孢翻lternariaalternata)；采用通用引物ITSl／ITS4對(duì)病原菌A和B的rDNA．ITS序列區(qū)擴(kuò)增并測(cè)序，通過(guò)與Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，A與A．solani同源性為98％，B與A．a(chǎn)lternata的同源性為100％，因此，將河北省馬鈴薯早疫病菌鑒定為茄鏈格孢似．solani)和鏈格孢似．a(chǎn)lternata)。2馬鈴薯早疫
3、病菌似．a(chǎn)lternata)對(duì)異菌脲和咯菌腈的敏感性采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定河北省馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)的85株早疫病菌對(duì)異菌脲的敏感性，結(jié)果表明，異菌脲對(duì)85株早疫病菌的EC50值介于0．2307～1．6464gg／mL之間，平均EC50值為O．53124-0．2124}tg／mL，呈單峰近正態(tài)分布，尚未出現(xiàn)敏感性明顯下降群體，為此可將供試菌株的平均EC50值作為馬鈴薯早疫病菌對(duì)異菌脲的敏感基線，用于將來(lái)開展田間抗性監(jiān)測(cè)?？┚鎸?duì)122株早疫病菌EC50值介于在0．0025～0．0857gg／mL之間，平均值為0．0404士0．0171gg／mL，相差34．87倍，呈單峰近正態(tài)分布，可作為早疫病菌對(duì)咯菌
4、腈的敏感基線。3馬鈴薯早疫病菌似．a(chǎn)lternata)對(duì)異菌脲和咯菌腈的抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估采用紫外線誘變和藥N-到ll化的方法分別獲得了7株和1株早疫病菌對(duì)異菌脲的抗性突變體，抗性倍數(shù)均在100倍以上，且抗性能穩(wěn)定遺傳；抗性突變體的菌絲生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢能力和致病力均顯著低于親本敏感菌株；抗性突變體較親本敏感菌株對(duì)NaCl滲透壓更敏感，其菌絲細(xì)胞膜透性明顯高于親本敏感菌株；早疫病菌對(duì)異菌脲與腐霉利和咯菌腈之間表現(xiàn)正交互抗性關(guān)系，而與毗唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑之間無(wú)交互抗性關(guān)系。采用紫外線誘變的方法獲得15株早疫病菌對(duì)咯菌腈的抗性突變體，抗性倍數(shù)均在10000倍以上，且抗性能穩(wěn)定遺傳；抗性突變體的菌絲生長(zhǎng)速率
5、、產(chǎn)孢能力和致病力均顯著低于其親本敏感菌株；抗性突變體較親本敏感菌株對(duì)NaCl滲透壓更敏感，其菌絲細(xì)胞膜透性明顯高于親本敏感菌株；早疫病菌對(duì)咯菌腈與異菌脲和腐霉利之問(wèn)存在正交互抗性關(guān)系，而與苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯之間無(wú)交互抗性關(guān)系。綜合分析表明，馬鈴薯早疫病菌對(duì)異菌脲和咯菌腈具有中等抗性風(fēng)險(xiǎn)，建議生產(chǎn)上將異菌脲或咯菌腈與其它無(wú)交互抗性關(guān)系的藥劑交替或混合使用，以延緩抗藥性的產(chǎn)生。4馬鈴薯早疫病菌似．a(chǎn)lternata)對(duì)異菌脲和咯菌腈的抗性分子機(jī)制紫外線誘導(dǎo)的抗異菌脲的突變體CCl一R1在組氨酸蛋白激酶保守區(qū)基因序列未發(fā)生堿基的突變；藥劑馴化的抗性突變體CCl．R5在該序列的第6位堿基由T突變
6、為G導(dǎo)致氨基酸從色氨酸(Trp)轉(zhuǎn)化為甘氨酸(Gly)；紫外誘導(dǎo)的抗性突變體WC2．29．R1和WC2—29．R2在該序列分別有1個(gè)和16個(gè)堿基突變，但氨基酸序列沒(méi)有發(fā)生變化。紫外線誘變的4個(gè)抗咯菌腈的突變體W15-R7、W15一R9、C7．1一R1l、C7—1．R15在組氨酸蛋白激酶保守區(qū)基因序列的第366位的堿基均由T突變?yōu)镃，同時(shí)W15．R7、C7．1．Rll、C7．1．R15在該序列的836位的堿基由G突變?yōu)锳，但兩個(gè)位點(diǎn)的突變均未引起編碼氨基酸的變化；C7．1．R11在該序列的1474位堿基的缺失導(dǎo)致組氨酸蛋白激酶氨基酸序列翻譯的終止。由此可推測(cè)馬鈴薯早疫病菌對(duì)異菌脲和咯菌腈的抗性不
7、只是由組氨酸激酶基因保守區(qū)域所控制的。關(guān)鍵詞：馬鈴薯早疫病菌；異菌脲；咯菌腈；敏感性；抗性風(fēng)險(xiǎn)；抗性分子機(jī)制Studiesonriskandmolecularmechanismofresistanceto]"prodioneandfludioxonilinAlternariaalternataroilinhItemrtaa1]Author：FanZi—yaoSpecialty：Fungicides
