抑制細(xì)胞自噬活性對(duì)結(jié)直腸癌sw480細(xì)胞凋亡影響的研究

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時(shí)間:2019-02-25

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1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文二、論文摘要抑制細(xì)胞自噬活性對(duì)結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞凋亡影響的研究中文摘要目的:通過(guò)自噬抑制劑聯(lián)合5一FU對(duì)結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞凋亡及自噬活性影響的研究,明確抑制腫瘤細(xì)胞自噬活性能否增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞在5一FU誘導(dǎo)下的凋亡率,為自噬抑制劑提高結(jié)直腸癌化療敏感性研究提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。方法:l、使用不同濃度5一FU(0,5,10,20,40,80腿/m1)作用于結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞,24h、48h后,CCK-8法檢測(cè)SW480細(xì)胞的存活率,并計(jì)算其半數(shù)抑制濃度,選用最佳抑制濃度,用

2、于下一步實(shí)驗(yàn)。2、挑選處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的生長(zhǎng)狀態(tài)良好、存活率高(90%以上)且致密度約為80—90%的SW480細(xì)胞,使用含5一FU(濃度為最佳抑制濃度)的10%胎牛血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)SW480細(xì)胞產(chǎn)生自噬現(xiàn)象并檢測(cè):透射電鏡檢測(cè)自噬體的雙層或多層膜結(jié)構(gòu)形成,熒光顯微鏡下觀察SW480細(xì)胞經(jīng)MDC染色后自噬泡的形成。誘導(dǎo)并檢測(cè)結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞自噬現(xiàn)象。3、根據(jù)藥物處理不同分為對(duì)照組、5一FU組(25腿/m1)、3_姒組(5mol/L)、5-FU+3一姒組,相應(yīng)藥物處理24h后,CCK-8檢測(cè)各組細(xì)胞活力,流

3、式細(xì)胞儀檢測(cè)MDC染色后熒光強(qiáng)度變化反應(yīng)自噬的比率以及各組細(xì)胞凋亡情況。最終明確自噬抑制劑3-姒對(duì)SW480細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:1、SW480細(xì)胞受不同濃度5一FU不同作用時(shí)間后,腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)受抑,呈現(xiàn)劑量依賴性,SW480細(xì)胞增殖抑制作用隨著藥物濃度的遞增和作用時(shí)問(wèn)的延長(zhǎng)而增加。5肛g/ml藥物濃度作用24h后細(xì)胞增值抑制率為37.5%,作用時(shí)間延長(zhǎng)至48h抑制率為61.9%;80№/ml藥物濃度作用24h后細(xì)胞增值抑制率為96.2%,作用時(shí)間延長(zhǎng)至48h抑制率為98.5%。其半數(shù)抑制濃度I%為26.3

4、pg/ml:選用2599/m1濃度5-FU于后期實(shí)驗(yàn)。2、25№/ml濃度的5_FU成功誘導(dǎo)SW480細(xì)胞產(chǎn)生自噬現(xiàn)象。在5一FU處理后的腸癌細(xì)胞,透射電鏡檢測(cè)可見膜泡結(jié)構(gòu)包裹細(xì)胞內(nèi)含物,其中含有變性的胞質(zhì)成分及被消化降解后形成的產(chǎn)物,有的尚未閉合,可認(rèn)為是自噬前體;有些細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡特征。MDC染色5一FU處理后的細(xì)胞,可見胞漿內(nèi)自噬泡呈現(xiàn)明顯的點(diǎn)狀熒光分布。3、5-FU(25P.g/m1)組平均熒光強(qiáng)度為28.5±5.2;當(dāng)使用自噬特異性抑制劑3_姒2溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文預(yù)處理后,自噬水平下降至接近對(duì)照

5、組水平(5-Fu+3—MA組平均熒光強(qiáng)度為11.9±6.6,對(duì)照組為12.4±3.5);3一姒組自噬水平明顯減低,平均熒光強(qiáng)度為5.6±1.5。5一FU組對(duì)照組比較之間的MDC熒光強(qiáng)度具有顯著性差異(P<0.01);5刪組與5一FU+3—MA組比較之間的MDC熒光強(qiáng)度同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P

6、18.88%顯著增加(P

7、率,自噬抑制劑3-姒能提高SW480細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性;自噬抑制劑可能是一種有效的治療結(jié)直腸癌的新型藥物。關(guān)鍵詞:5一氟尿嘧啶細(xì)胞自噬結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞細(xì)胞凋亡溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文InhibitionofAutophagyActivityEnhancestheEffectofApoptosisinColonCancerCellSW480Abstractobjective:Inthisstudy,theapoptosisandautophagywasinvestigatedincolonCanC.圮

8、l"sw480cellswhichweretreated誦mcombinationof5-FUwinlautophagyinhibitor,tofindoutifthe5-FU-inducedapoptosisincoloncancercellscouldbeenhancedbytheinhibitorofautophagy.Thatcouldbeapromisingstrategyfortheadjuvantc

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