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1、青島大學(xué)碩士學(xué)位論文谷氨酰胺在大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷中對(duì)HSP70的誘導(dǎo)表達(dá)姓名：高小琴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：王大博20120522谷氨酰胺在大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷中對(duì)HSPTO的誘導(dǎo)表達(dá)摘要目的：在NMDA所致大鼠視網(wǎng)膜興奮損傷模型中，檢測(cè)谷氨酰胺誘導(dǎo)HSP70的表達(dá)及隨時(shí)間的變化。方法：健康清潔型Wistar大鼠70只隨機(jī)分為三組，正常對(duì)照組10只，空白對(duì)照組10只、實(shí)驗(yàn)組即谷氨酰胺腹腔注射組50只。正常對(duì)照組不做任何處理，空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中所有大鼠均隨機(jī)取大鼠一只眼球玻璃體腔注射
2、2
3、l180mmol／lNMDA制作視網(wǎng)膜興奮性損傷模型，實(shí)驗(yàn)組在大鼠視網(wǎng)膜損傷興奮性損傷模型制作2天后分別腹腔注射谷氨酰胺(0．759／KR)，并于注射后1h，4h，8h，12h，24h各隨機(jī)處死10只大鼠，其中1h時(shí)同時(shí)將空白對(duì)照組及正常對(duì)照組所有大鼠處死。HE染色光鏡下觀察各組視網(wǎng)膜組織的形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色方法及WesternBlot分析視網(wǎng)膜HSP70表達(dá)的變化。結(jié)果：HE染色顯示正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)層次清楚，染色均勻，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則?？瞻讓?duì)照組與實(shí)驗(yàn)組中不同時(shí)間段的大鼠視網(wǎng)膜
4、均顯示視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目較正常大鼠減少，排列紊亂，神經(jīng)纖維層與內(nèi)核層可見(jiàn)萎縮，視網(wǎng)膜整體變薄。WesternBlot分析結(jié)果顯示，正常對(duì)照組和空白對(duì)照組僅有少量HSP70的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組注射1h后HSPTO的表達(dá)開(kāi)始增強(qiáng)，4h后表達(dá)明顯增多，8h達(dá)到高峰并持續(xù)到12h，24h表達(dá)較前減少，但仍顯著高于對(duì)照組。免疫組織化學(xué)染色顯示誘導(dǎo)表達(dá)的HSP70在視網(wǎng)膜各層細(xì)胞均有顯著表達(dá)，而正常對(duì)照組及空白對(duì)照組HSP70僅微量表達(dá)于外核層及光感受器內(nèi)節(jié)。免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞光密度值測(cè)定結(jié)果與WesternB10
5、t結(jié)果相吻合。結(jié)論：1．成功建立大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型；2．正常情況下和玻璃體腔注射NMDA2天后大鼠視網(wǎng)膜微量表達(dá)HSP70；3．腹腔注射谷氨酰胺可以在大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷中誘導(dǎo)HSPTO的強(qiáng)烈表達(dá)。碩士研究生：高小琴(眼科學(xué))指導(dǎo)老師：王大博教授關(guān)鍵詞：谷氨酰胺；熱休克蛋白70；N一甲基天冬氨酸；青光眼GlutamineinducesHSP70onretinalexcitotoxicityinjuryintheratAbstractPURPOSE．Toobservetheeffectsofglu
6、tamine(GLN)ontheexpressionofHSP70intherat’SretinaexcitotoxicityinjuryinducedbyNMDA．METHODS．Atotalof70ratswererandomlydividedintothreegroups，normalcontrolgroupincluding10rats，blankcontrolgroupincluding10rats，experimentalgroupinwhichratsweretreatedwithglu
7、tamineincluding50rats．Theratsofnormalcontrolgroupreceivednotreatment．2ttlofNMDAofconcentrationof80nmol／1wasintravtrealinjectedintotheonerandomeyeofeveryanimalofexperimentalgroupandblankcontrolgroup．Aftertwodays，theratsinexperimentalgroupwereintraperiton
8、ealinjectedwithglutamine(0．759／kg)and10ratsweresacrificedatlh，4h，8h，12h，24hrandomlyandrespectivelyafterglutamineadministration．Theratsinnormalcontrolgroupandblankcontrolgroupweresacrificedatlh．Therats’retinawereHEstainedandobservedunderlightmicroscope，a
9、ndtheexpressionlevelofHSP70weredetectedbyimmunohistochemistryandWesternblotanalysis．RESULT．HEstainingshowthestructureofretinaofnormalcontrolgroupwashistologicallywell·defined，uniforminstaining，andwithregularcellshape．Inblankcontr
