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1、氧化鋁固相萃取小柱在苦參生物堿含量測(cè)定中應(yīng)用摘要該文使用中性氧化鋁CleanertAlumina-N-SPE小柱(0.5g/6mL),洗脫劑為三氯甲烷-甲醇(7:3)5mL,代替氧化鋁開放柱(100?200目，5g,內(nèi)徑1cm),依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7：3)各20mL進(jìn)行洗脫對(duì)苦參藥材供試液進(jìn)行處理，該方法優(yōu)化洗脫溶劑使用種類和數(shù)量，并優(yōu)化了苦參藥材中苦參堿和氧化苦參堿含量測(cè)定的色譜條件，將2010年版《中國(guó)藥典》中流動(dòng)相條件乙睛-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10)優(yōu)化為乙睛-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液(84：6：10)；簡(jiǎn)化了2010年版《中
2、國(guó)藥典》規(guī)定苦參藥材供試液的前處理，縮短了樣品處理時(shí)間，減少了洗脫溶劑，結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠，適合苦參藥材中含量的測(cè)定,提高苦參藥材中苦參生物堿含量測(cè)定的工作效率。關(guān)鍵詞苦參；固相萃取柱；方法優(yōu)化收稿日期2013-03-04通信作者*郭寶林,Tel:(010)57833172,E-mail：guobaolin010@163.com作者簡(jiǎn)介楊霞，Tel:(0355)8096033,E-mail：yangxiaxy@yeah.net苦參為常用中藥，來(lái)源于豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根，具有清熱燥濕、殺蟲利尿之功效?？鄥⒑猩飰A類、黃酮
3、類等多種化學(xué)成分，其中生物堿類中的苦參堿(matrine)＞氧化苦參堿(oxymatrine)是2010年版《中國(guó)藥典》規(guī)定的苦參藥材質(zhì)量控制成分。文獻(xiàn)報(bào)道苦參生物堿的含量測(cè)定方法中，大多參照2010年版《中國(guó)藥典》方法[1-2],部分用酸堿處理和液液萃取的方法[3-4],也有直接提取液進(jìn)樣檢測(cè)的報(bào)道[5-6],但后者樣液雜質(zhì)多，影響色譜柱的壽命。固相萃取(SPE)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)樣品萃取技術(shù)。已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥品、代謝物、食品成分檢測(cè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面，但在藥典中的中藥樣品前處理應(yīng)用尚不夠普及[7-10]o2010年版《中國(guó)藥典》記載的苦參含量測(cè)
4、定過(guò)程中采用開放的中性氧化鋁萃取柱進(jìn)行樣品前處理，洗脫時(shí)間長(zhǎng)，洗脫劑用量多，難以滿足生產(chǎn)實(shí)踐及科學(xué)研究中大量苦參樣品的含量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)利用SPE柱代替中性氧化鋁開放柱，旨在除去藥材中的部分雜質(zhì)以保護(hù)色譜柱的使用壽命；相比藥典記載的中性氧化鋁柱，SPE柱簡(jiǎn)化苦參藥材前處理過(guò)程，提高工作效率。1材料PerkineElmer高效液相色譜儀(FlexarLCpump,FlexarPDADetector,FlexarSolventManager,Totalchron工作站)；CleanertAlumina-N-SPE固相萃取柱(Agela公司)；SHANGPINGFA2
5、104(1/1萬(wàn))電子天平。乙月青（色譜純，美國(guó)Honeywel1公司）；娃哈哈純凈水;無(wú)水乙醇（色譜純，天津市豐越化學(xué)品有限公司）；其他試劑均為分析純。苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品為山西振東光明研究院制備，用于含量測(cè)定（面積歸一法測(cè)定質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為99.84%,98.55%）O苦參藥材樣品1?4來(lái)自于山西長(zhǎng)治振東道地藥材開發(fā)有限公司中藥材公司苦參種植基地的不同采集點(diǎn)，樣品5來(lái)自于河南盧氏野生藥材，均由中國(guó)科學(xué)院藥用植物研究所郭寶林研究員鑒定。2方法和結(jié)果2.1色譜條件及優(yōu)化Venus訂XBPNH2色譜柱（4.6mmX250mm,5um）,檢測(cè)波長(zhǎng)為220nnio
6、作者發(fā)現(xiàn)在2010年版《中國(guó)藥典》記載的流動(dòng)相條件下，即乙睛-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液（80:10:10）,氧化苦參堿峰前位有雜質(zhì)小肩峰，流動(dòng)相條件調(diào)整為乙膳-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液（84：6：10）時(shí)，氧化苦參堿和小峰的得到良好分離，氧化苦參堿的出峰時(shí)間僅加長(zhǎng)了大約3min,見圖lo因此確定后者為本實(shí)驗(yàn)的色譜條件。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品25.0mg,氧化苦參堿對(duì)照品24.7mg,分別加乙惰-無(wú)水乙醇（80:20）溶解定容到50mL量瓶中作為儲(chǔ)備液，對(duì)照品色譜圖見圖lo1?苦參堿；2?氧化苦參堿；A.對(duì)照品；B：藥材。圖1苦參堿和氧化苦參堿對(duì)
7、照品的HPLC圖Fig.1HPLCofmatrineandoxymatrinereferencesubstance2.3固相萃取法制備供試液方法的建立2.3.1固相萃取法和藥典樣品處理方法的比較藥典樣品處理方法參考文獻(xiàn)［11］。選擇與2010年版《中國(guó)藥典》方法使用填料量相近的CleanertAlumina-N-SPE小柱(5g/12mL)代替中性氧化鋁開放柱進(jìn)行樣品處理。比較苦參堿和氧化苦參堿峰面積，見表1o結(jié)果表明CleanertAlumina-N-SPE小柱處理后雜質(zhì)去除效果與2010年版《中國(guó)藥典》記載方法相近，苦參堿和氧化苦參堿的峰面積分別高3.43
8、%,2.06%o2.3.2幾種不同填料
