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《（果樹(shù)學(xué)專業(yè)論文）葡萄種質(zhì)資源rapd分析及親緣關(guān)系研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、摘要葡萄在長(zhǎng)期的進(jìn)化和栽培歷史中，由于本身的變異、自然雜交、栽培環(huán)境不同等形成了不同的品種類型，使得葡萄的分類鑒定難度加大，命名混亂。本試驗(yàn)以歐亞、歐美雜種部分品種及砧木品種為材料，應(yīng)用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)53個(gè)葡萄樣品的遺傳多樣性進(jìn)行了隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)研究，通過(guò)NTSYSpct.10e軟件對(duì)RAPD的擴(kuò)增譜帶進(jìn)行分析，進(jìn)行葡萄品種的分子鑒定和分類研究，探討葡萄品種之間的親緣關(guān)系。其主要的試驗(yàn)結(jié)果如下:1.通過(guò)采用CTAB,SDS和高鹽低PH法三種DNA提取方法提取葡萄幼嫩葉片DNA，分別對(duì)其進(jìn)行紫外吸
2、收檢測(cè)、電泳檢測(cè)和RAPD檢測(cè)，結(jié)果表明;三種方法DNA完整性好，RAPD擴(kuò)增帶清晰，A260/A280的值在1.7-2.0之間，符合RAPD反應(yīng)的要求，都可用于葡萄基因組DNA提取。其中以CTAB法提取的DNA質(zhì)量最好，本試驗(yàn)選用CTAB法進(jìn)行。2.通過(guò)對(duì)模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶、dNTP和M獷濃度的優(yōu)化試驗(yàn)及對(duì)PCR反應(yīng)程序的篩選，確定了本研究的適宜反應(yīng)體系和反應(yīng)程序。反應(yīng)體系:25u1反應(yīng)體系中，含2.5u1IOXbuffer(PH=8.8),50ngDNA,0.4umo1/L隨機(jī)引物，200umo1/L
3、dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP)，1UTaqDNA聚合酶、2.OMMMgt'以及純凈水15.5ul。反應(yīng)程序?yàn)?94℃預(yù)變性2min;94℃變性lmin;36℃退火lmin;72℃延伸2min;39個(gè)循環(huán);72'C延伸5min;4℃保溫。3，利用對(duì)280個(gè)引物進(jìn)行篩選所得到的33個(gè)引物對(duì)53個(gè)葡萄樣品進(jìn)行RAPD分析，擴(kuò)增片段大小為300-3000bp，共檢測(cè)到325個(gè)位點(diǎn)，其中275個(gè)是多態(tài)位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)百分比達(dá)到84.6%。平均每個(gè)引物獲得9.85個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn)，其中具有多態(tài)性的位點(diǎn)為8.33個(gè)。各品種間
4、多態(tài)位點(diǎn)百分比變化范圍為58.3-100.0%，其中多態(tài)位點(diǎn)百分比最高的是引物S60,5514,S1399,S1478,32122,S510,S1468,S6和5284，最低的是引物5216。這說(shuō)明了本試驗(yàn)所用的53份材料的遺傳多樣性很高。4.通過(guò)對(duì)兩個(gè)同名高妻及其親本的遺傳距離和指紋圖譜分析，并結(jié)合形態(tài)學(xué)分析，從分子水平上對(duì)其兩個(gè)品種進(jìn)行區(qū)分，從而為糾正目前品種命名雜亂的現(xiàn)狀提供依據(jù)。5.利用RAPD技術(shù)對(duì)53份葡萄材料進(jìn)行分類研究，通過(guò)聚類分析，估算遺傳距離，建立樹(shù)狀圖;利用分子手段對(duì)葡萄遺傳變異和親緣關(guān)系進(jìn)行研究，為
5、葡萄遺傳多樣性的保護(hù)以及保護(hù)策略的制定提供了科學(xué)的依據(jù)，也為葡萄育種提供了一個(gè)有價(jià)值的參考，同時(shí)在果樹(shù)遺傳理論研究與育種相結(jié)合上作了有益的探索。關(guān)鍵詞:葡萄種質(zhì)資源RAPD親緣關(guān)系A(chǔ)bstractOwingofthevariationwithinthespecies,easilynaturecrossbetweenspeciesandwidegeneration,differeptplantingenvironmentintheworld,manyspeciespopulationsandvariety.groupsofG
6、rape(vitis)havebeenforminginthelonghistoryofgrapeevolutionandculturing,whichmaketaxonomyandidentificationofgrapesdificultandnamingconfusing.Thestudywasundertakentoidentifygrape(vitis)materialofseveralgrapesofVviniferaL.andV.1abruscaL.androotstockbyRAPD.Thispaperma
7、inlystudiesthegeneticdiversityof53seriesgrapesonRAPD.TheaimofthestudiesontheamplificationpaternsofRAPDgotbyNTSYSpc2.l0eistoidentificateandtaxonomygrape,studylinkagedistance.Themainresultsasbelow:1.Themethods-CTABmethod,SDSmethod,andhighsalinityandlowPHmethodwereus
8、edtoextractgenomicDNAfromleavesofgrape.TheDNAsamplesofthethreemethodsweretestedbyspectrophotometer,agarosegelelectrophoresisandRAPD.TheresultwasthattheD
