seldi蛋白芯片技術(shù)篩選肝癌血清標(biāo)志蛋白研究

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1、SELDI蛋白芯片技術(shù)篩選肝細(xì)胞性肝痛m清標(biāo)志蛋白的研究2005級(jí)碩士研究生學(xué)位論文．二‘JL．--JL刖吾肝癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)在我國(guó)占原發(fā)性肝癌的90％。肝癌的惡性度極高，發(fā)生發(fā)展迅速，病人預(yù)后差。流行病學(xué)資料顯示，全球肝癌發(fā)病率在各種癌癥中位于第八位，病死率位于第四位，每年約有50一100萬(wàn)人因肝癌致死。與70年代比較，中國(guó)肝癌死亡率水平有了較大幅度的增高，與世界其他國(guó)家相比，我國(guó)肝癌死亡率處于較高水平，位居各國(guó)肝癌死亡率之首?，其中

2、90％是船V感染者經(jīng)過(guò)15—25年的慢性過(guò)程轉(zhuǎn)化而來(lái)的，且表面抗原(HBsAg)陽(yáng)性的持續(xù)攜帶者比非HBsAg陽(yáng)性者其HCC的發(fā)生率高100倍乜3。由于HCC患者早期常無(wú)明顯癥狀，發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬中、晚期，患者預(yù)后差。因此，迫切需要探索一種快速、簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性好的早期診斷方法。隨著不同時(shí)期新的診斷方法問(wèn)世，肝癌的診斷已從30年代的“死后診斷”進(jìn)展到“臨床診斷"以及70年代的“亞臨床診斷”。70年代初，甲胎蛋白的臨床應(yīng)用使肝癌診斷向前邁進(jìn)一大步。80年代實(shí)時(shí)超聲、計(jì)算機(jī)斷層攝影(CT)、磁共振成像(MRI)等新的定位

3、診斷方法問(wèn)世使肝癌的診斷更日臻完美，使得亞臨床期診斷提高到1cm肝癌水平，臨床期肝癌的診斷更為準(zhǔn)確。常規(guī)的肝癌診斷主要為：血清AFP檢測(cè)，肝臟B超檢查或核磁共振檢查，肝動(dòng)脈造影，肝穿刺活組織檢查，外科手術(shù)活檢或冰凍切片檢查等。目前肝癌的早期診斷主要是以血清AFP的測(cè)定結(jié)合影像學(xué)檢查為主。其中AFP已成為最有價(jià)值的肝癌標(biāo)志物，多年以來(lái)一直作為診斷肝癌的重要參考依據(jù)，并己成為國(guó)際上肝癌早期診斷較好的指標(biāo)。但是30％一40％的肝癌病人的AFP陰性∞’SELDI蛋白芯片技術(shù)篩選盯細(xì)胞性肝癌血清標(biāo)志蛋白的研究2005級(jí)碩士研究

4、生學(xué)位論文釗，常使臨床的早期診斷遇到這兩種情況：一是APP濃度高于正常(20ug／L)但不達(dá)到診斷肝癌的標(biāo)準(zhǔn)(400ug／L)，如若影像診斷未有肝內(nèi)占位性病變發(fā)現(xiàn)，則可能被視為肝病活動(dòng)，長(zhǎng)期門(mén)診隨訪(fǎng)，而坐失根治良機(jī)。二是AFP陰性病例，實(shí)時(shí)超聲出現(xiàn)可疑占位性病變而無(wú)法定性。再作CT、磁共振成像、放射性核素掃描等等，每每眾說(shuō)紛紜，結(jié)論不一，因而延誤了肝癌的早期診斷。為此近年來(lái)提倡多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)以提高檢測(cè)的靈敏度和特異度璐3，但多項(xiàng)指標(biāo)組合在提高肝癌診斷敏感性的同時(shí)，降低了其特異性及準(zhǔn)確性∞、71，因此多種標(biāo)志物聯(lián)合

5、檢測(cè)的應(yīng)用也具有了一定的局限性。因此，尋找有效的腫瘤標(biāo)志物用于癌變機(jī)理研究、藥物靶標(biāo)的設(shè)計(jì)、疾病的早期診斷及高危人群的篩查成為肝癌研究的當(dāng)務(wù)之急。人類(lèi)基因組序列草圖完成后，生命科學(xué)進(jìn)入了“后基因組時(shí)代”，研究的重點(diǎn)轉(zhuǎn)向了對(duì)復(fù)雜的蛋白質(zhì)功能的研究。蛋白質(zhì)是基因表達(dá)的最終產(chǎn)物，器官組織的生理狀態(tài)變化會(huì)引起血清蛋白質(zhì)組的改變，因此對(duì)蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行研究可以直接獲取疾病的特征性標(biāo)志，同時(shí)通過(guò)研究人們認(rèn)識(shí)到由于人血清是一個(gè)蛋白質(zhì)相當(dāng)豐富并不斷變化的系統(tǒng)，單一的血清腫瘤標(biāo)記物難以真正反溯到相關(guān)的細(xì)胞組織，而發(fā)現(xiàn)一組與特定組

6、織癌變相關(guān)的血清蛋白質(zhì)(多參數(shù)標(biāo)記物)則是更有效的途徑，這也就是所謂的“癌癥指紋川踟(Cancersignature)，而高通量的表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI—TOF_MS)的出現(xiàn)加速了開(kāi)展發(fā)現(xiàn)“癌癥指紋”的研究。目前利用SELDI技術(shù)發(fā)現(xiàn)腫瘤的特殊生物學(xué)標(biāo)記，對(duì)于腫瘤的早期診斷具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和重要的意義，在多種腫瘤的研究中顯示出良好的應(yīng)用前景∞“釗，其中對(duì)卵巢癌的敏感性達(dá)100％，已獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于臨床n朝。SELDl蛋白：卷片技術(shù)篩選肝細(xì)胞性肝癌血清標(biāo)志蛋白的研究2005級(jí)碩二l：研究生學(xué)

7、位論文表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI—TOF-MS)是在MALDI—TOF_MS基礎(chǔ)上改良的，其通過(guò)特殊的增強(qiáng)表面式芯片直接捕獲待測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)分子，然后經(jīng)激光解吸離子化一飛行時(shí)間一質(zhì)譜測(cè)定被捕獲的蛋白質(zhì)的質(zhì)量和電荷比(SELDI技術(shù)的原理圖見(jiàn)圖1)。SELDI技術(shù)應(yīng)用的蛋白質(zhì)芯片分為生物型芯片和化學(xué)型芯片。生物型芯片是在一塊微小的固體表面上結(jié)合抗體或抗原、DNA、酶、受體，作為攝取抗原或抗體、DNA結(jié)合蛋白、底物、配體等特異蛋白；化學(xué)型芯片主要根據(jù)蛋白質(zhì)的疏水性、親水性、離子的特性分為疏水型芯片、親

8、水性芯片、弱陽(yáng)離子交換型芯片、強(qiáng)陰離子交換型芯片等，這些化學(xué)型芯片可以非特異或特異性結(jié)合蛋白質(zhì)。該技術(shù)主要特點(diǎn)為可直接在芯片上進(jìn)行樣品前處理，芯片上所設(shè)計(jì)的不同特性化合物可與樣本中特定種類(lèi)的蛋白質(zhì)相結(jié)合，直接串聯(lián)飛行時(shí)間一質(zhì)譜儀進(jìn)行分析。所出現(xiàn)的質(zhì)譜圖重復(fù)性很高，可用于不同來(lái)源的樣品比較。特別適用于檢測(cè)質(zhì)量小于20KDa的蛋白質(zhì)分子，如細(xì)胞因子