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1、1第八節(jié)污染的防止與挽救污染:微生物發(fā)酵為純種發(fā)酵,如有他菌侵入稱為污染。一、雜菌污染的防止與挽救(一)危害性1、引起異常發(fā)酵會影響產物產量①生產菌的生長受抑制測OD值菌濃度下降②C、N消耗加速,ph值的不正常變化③泡沫一般增多粘稠顏色加深,使培養(yǎng)液發(fā)酵發(fā)臭④發(fā)酵周期縮短22、影響產物提煉,使產物質量不得保證如溶媒存在,使培養(yǎng)液乳化,不易分層(1)有機溶劑萃取工藝:染菌的發(fā)酵液含有更多的水溶性蛋白質,易發(fā)生乳化,使水相和溶劑相難以分開(2)離子交換工藝:雜菌易粘附在離子交換樹脂表面或被離子交換樹脂吸附,大大降低離子交換樹脂的交換量33
2、,對產品質量的影響(1)對內在質量的影響:染菌的發(fā)酵液含有較多的蛋白質和其它雜質。對產品的純度有較大影響。(2)對產品外觀的影響:一些染菌的發(fā)酵液經處理過濾后得到澄清的發(fā)酵液,放置后會出現混濁,影響產品的外觀。44,對過濾的影響發(fā)酵液的粘度加大;菌體大多自溶;由于發(fā)酵不徹底,基質的殘留濃度加度。造成過濾時間拉長,影響設備的周轉使用,破壞生產平衡;大幅度降低過濾收率。5,染菌對三廢處理的影響使過濾后的廢菌體無法利用,發(fā)酵染菌的廢液,生物需氧量(BOD)增高,增加三廢治理費用和時間。發(fā)酵染菌的危害1,直接經濟損失2,間接經濟損失5(二)、
3、與危害程度相關的幾個方面①與產品的品種有關,酒精和丙酮丁酸較小AA.核酸嚴重抗生素(窄譜廣譜)②染菌與發(fā)酵周期有關,發(fā)酵周期長,較易染菌,如前中期染菌后果較嚴重。6③雜菌類型染球菌:后果較嚴重,其繁殖速度特快,染短桿菌:后果較嚴重,染菌的時間越早,危害越大,染菌量越多,危害越大。④染菌原因:公共系統(tǒng)引起染菌,影響面大,后果嚴重,公共系統(tǒng)為空氣,總過濾器,空氣管道不嚴密,公共補料系統(tǒng),公共系統(tǒng)染菌,就會引起連續(xù)染菌,大面積染菌。7(三)、發(fā)酵過程中染菌的檢查判斷1,雜菌的檢查方法借助適當的方法,才能正確而及時地發(fā)現發(fā)酵過過程是否污染雜菌
4、和染菌的原因與途徑。檢查雜菌的方法,要求淮確可靠和快速,這樣才能在短時間內獲得效果。目前生產上常用的檢查方法有:①顯微鏡檢查;②平板劃線檢查;③肉湯培養(yǎng)檢查。8判斷發(fā)酵是否染菌應以無菌試驗結果為根據。無菌試驗的目的:(1)監(jiān)測培養(yǎng)基、發(fā)酵罐及附屬設備滅菌是否徹底(2)監(jiān)測發(fā)酵過程中是否有雜菌從外界侵入(3)了解整個生產過程中是否存在染菌的隱患和死角92,各種檢查方法的比較3種方法各有優(yōu)缺點,顯微鏡檢查方法簡便、快速,能及時發(fā)現雜菌,但由于鏡撿取樣少,視野的觀察面也小,因此不易撿出早期雜菌。平板劃線法的缺點是需經較長時間培養(yǎng)(一般要過夜
5、)才能判斷結果,且操作較繁瑣,但它要比顯微鏡能撿出更少的雜菌。103,雜菌檢查中的問題(1),檢查結果應以平板劃線和肉湯培養(yǎng)結果為主要根據(2),平板劃線和肉湯培養(yǎng)應做三個平行樣(3),要定期取樣(4),酚紅肉湯和平板劃線培養(yǎng)樣品應保存至放罐后12小時,確定為無菌時方可棄去(5),取樣時防止外界雜菌混入的措施11124,檢查的工序和時間選擇那些生產工序和時間的樣品檢查也是十分重要的問題??茖W合理的選擇檢查工序和時間,對于除去已污染雜菌的物料,避免下道工序再遭染菌,有著直接的指導意義。有時即使由于檢查時間較長,未能及時指導本批生產,但對
6、于找出造成染菌事故的環(huán)節(jié),分析染菌原因,杜絕染菌漏洞也是不可缺少的。由于生產菌種及產品的不同,檢查的時間也不完全一樣:但總的原則是一致的,即每個工序或經一定時間都應進行取樣檢查。檢查的一般時間或工序見下表。13發(fā)酵過程的雜菌檢查14除了以上的方法外,在實際生產中還可以根據pH值、尾氣中CO2含量和溶解氧等參數的異常變化來判斷是否染菌。15(四)、發(fā)酵染菌率和染菌原因的分析發(fā)酵染菌能給生成帶來嚴重危害,防止雜菌污染是任何發(fā)酵工廠的一項重要工作內容。尤其是無菌程度要求高的液體深層發(fā)酵,污染防止工作的重要性更為突出。發(fā)酵設備、空氣除菌系統(tǒng)和
7、培養(yǎng)基滅菌系統(tǒng)等的有關設備以及管道的配置都必須嚴格符合無菌要求。如果設備結構和管道配置不合理,制造、安裝不注意或在發(fā)酵過程中操作不慎就會使發(fā)酵液污染雜菌,導致產量下降甚至得不到產品。在發(fā)酵前期或中期染菌,雜菌會很快消耗掉營養(yǎng)物質,使生產菌無法正常生長而引起倒罐。在發(fā)酵后期染菌,雖然沒有早期或中期染菌的影響大,一般會使產率下降并影響產物的提取,但如核苷酸等某些產品的發(fā)酵即使在后期染菌,也會使發(fā)酵產物被所染雜菌迅速消耗掉而得不到產品。16因此,染菌問題是影響產率和后工序操作的主要因素之一,必須予以重視。認為染菌是不可避免的,這是一種錯誤看
8、法。“決定的因素是人不是物”。只要我們思想上重視,對各個因素和環(huán)節(jié)周密考慮、嚴格掌握,是完全可以避免和減少污染的。本節(jié)將根據以往工廠中發(fā)生染菌事故的經驗教訓來分析發(fā)酵系統(tǒng)中染菌的原因,來認識整個發(fā)酵過程中可能造成污染的各