基于蛋白激酶ck2α的高通量藥物篩選

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1、萬方數(shù)據(jù)中圖分類號:UDC:學(xué)校代碼:10055密級:公開薏蕊夫浮碩士學(xué)位論文基于蛋白激酶CK2(x的高通量藥物篩選High··ThroughputScreeningofInhibitorsforCK2a論文作者睦差椹申請學(xué)位理堂亟±學(xué)科專業(yè)生塑絲堂皇岔王生物堂答辯委員會主席鎣醫(yī)塞指導(dǎo)教師婁蟹勇副塾援培養(yǎng)單位生金抖堂堂院研究方向生物醫(yī)藥評閱人拯遮處洼南開大學(xué)研究生院二。一四年五月萬方數(shù)據(jù)南開大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本

2、學(xué)位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名:年月日非公開學(xué)位論文標(biāo)注說明(本頁表中填寫內(nèi)容須打印)根據(jù)南開大學(xué)有關(guān)規(guī)定,非公開學(xué)位論文須經(jīng)指導(dǎo)教師同意、作者本人申請和相關(guān)部門批準(zhǔn)方能標(biāo)注。未經(jīng)批準(zhǔn)的均為公開學(xué)位論文,公開學(xué)位論文本說明為空白。論文題目申請密級口限制(≤2年)口秘密(≤10年)口機(jī)密(s20年)保密期限年月至年月審批表編號批準(zhǔn)日期年月日南

3、開大學(xué)學(xué)位評定委員會辦公室蓋章(有效)注:限制★2年《可少于2年);秘密*iO年(可少于10年);機(jī)密★20年(可少于20年)萬方數(shù)據(jù)南開大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)書根據(jù)<南開大學(xué)關(guān)于研究生學(xué)位論文收藏和利用管理辦法》,我校的博士、碩士學(xué)位獲得者均須向南開大學(xué)提交本人的學(xué)位論文紙質(zhì)本及相應(yīng)電子版。本人完全了解南開大學(xué)有關(guān)研究生學(xué)位論文收藏和利用的管理規(guī)定。南開大學(xué)擁有在《著作權(quán)法》規(guī)定范圍內(nèi)的學(xué)位論文使用權(quán),即:(1)學(xué)位獲得者必須按規(guī)定提交學(xué)位論文(包括紙質(zhì)印刷本及電子版),學(xué)校可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存研究生學(xué)位

4、論文,并編入《南開大學(xué)博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》;(2)為教學(xué)和科研目的,學(xué)校可以將公開的學(xué)位論文作為資料在圖書館等場所提供校內(nèi)師生閱讀,在校園網(wǎng)上提供論文目錄檢索、文摘以及論文全文瀏覽、下載等免費(fèi)信息服務(wù);(3)根據(jù)教育部有關(guān)規(guī)定,南開大學(xué)向教育部指定單位提交公開的學(xué)位論文:(4)學(xué)位論文作者授權(quán)學(xué)校向中國科技信息研究所及其萬方數(shù)據(jù)電子出版社和中國學(xué)術(shù)期刊(光盤)電子出版社提交規(guī)定范圍的學(xué)位論文及其電子版并收入相應(yīng)學(xué)位論文數(shù)據(jù)庫,通過其相關(guān)網(wǎng)站對外進(jìn)行信息服務(wù)。同時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)利。非公開學(xué)位論文,保密

5、期限內(nèi)不向外提交和提供服務(wù),解密后提交和服務(wù)同公開論文。論文電子版提交至校圖書館網(wǎng)站:http:N202.113.20.161:8001/index.htm。本人承諾:本人的學(xué)位論文是在南開大學(xué)學(xué)習(xí)期間創(chuàng)作完成的作品,并已通過論文答辯;提交的學(xué)位論文電子版與紙質(zhì)本論文的內(nèi)容一致,如因不同造成不良后果由本人自負(fù)。本人同意遵守上述規(guī)定。本授權(quán)書簽署一式兩份,由研究生院和圖書館留存。作者暨授權(quán)人簽字:南開大學(xué)研究生學(xué)位論文作者信息年月日論文題目基于蛋白激酶CK20t的高通量藥物篩選姓名陸美棋學(xué)號2120110962答辯日期20

6、14年5月22日論文類別博士口學(xué)歷碩士團(tuán)碩士專業(yè)學(xué)位口高校教師口同等學(xué)力碩士口院/系/所生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)系電話13820674159EmailLumeiqi88@126.com通信地址(郵編):天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)洞庭路220號備注:是否批準(zhǔn)為非公開論文否注:本授權(quán)書適用我校授予的所有博士、碩士的學(xué)位論文。由作者填寫(一式兩份)簽字后交校圖書館,非公開學(xué)位論文須附《南開大學(xué)研究生申請非公開學(xué)位論文審批表》。萬方數(shù)據(jù)摘要蛋白激酶CK2廣泛分布于真核細(xì)胞之中,是一種高度保守性的絲/蘇氨酸蛋白激酶,包含有兩

7、個(gè)催化亞基(a/a’)與調(diào)節(jié)亞基(B)。有相關(guān)的研究已表明蛋白激酶CK2在細(xì)胞周期、分化與增殖過程中發(fā)揮重要作用,亦能調(diào)控一些腫瘤抑制蛋白、原癌基因的活性與穩(wěn)定性,在許多腫瘤細(xì)胞中都發(fā)現(xiàn)CK2的活性升高或是被激活。還有相關(guān)研究表明CK2可以通過磷酸化促細(xì)胞凋亡蛋白來抑制細(xì)胞凋亡,以阻止凋亡調(diào)控。因此,降低CK2的活性或使用小分子抑制劑來抑制其活性,能夠減少體內(nèi)癌細(xì)胞的生長。本研究以催化亞基CK2a作為分子靶點(diǎn),從分子克隆構(gòu)建重組質(zhì)粒開始,通過嘗試不同的表達(dá)宿主,最終發(fā)現(xiàn)在大腸桿菌E.coliBL21(DE3)表達(dá)宿主中可

8、以獲得表達(dá)量較高的可溶性蛋白激酶CK2a;重組蛋白經(jīng)金屬離子親和層析及離子交換層析技術(shù)進(jìn)行分離純化,得到了較高純度的蛋白,并采用分光光度法測定其活性,建立了穩(wěn)定的酶活體系(Z.因子=0.74);然后采用高通量藥物篩選技術(shù)手段對化合物庫中500余種化合物進(jìn)行篩選,共篩選出了7個(gè)抑制率較高的化合物,抑制效果最好的IC50

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