斐林試劑和雙縮脲試劑應(yīng)該如何使用

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1、斐林試劑和雙縮脲試劑應(yīng)該如何使用--------一道高考試題帶來的思考人教版必修1《分子與細胞》中斐林試劑為質(zhì)量濃度為0.1%NaOH和0.05%CuSO4組成，使用時兩者先要1:1混合；雙縮脲試劑為質(zhì)量濃度為0.1%NaOH和0.01%CuSO4組成，使用時先要加雙縮脲試劑A液（0.1%NaOH）1ml，再滴加3-4滴雙縮脲試劑B（0.01%CuSO4）。筆者在看到2017年一道高考試題的D選項時產(chǎn)生了疑問，高考試題如下：[2017全國I卷]2.下列關(guān)于細胞結(jié)構(gòu)與成分的敘述，錯誤的是（）A.細胞膜的完整性可用臺盼藍染色色法進行檢測B.檢

2、測氨基酸的含量可用雙縮脲試劑進行顯色C.若要觀察處于細胞分裂中期的染色體可用醋酸洋紅液染色D.斐林試劑是含有Cu2+的堿性溶液，可被葡萄糖還原成磚紅色疑問：既然斐林試劑和雙縮脲試劑的成分相同，原理都是堿性條件下的Cu2+與還原糖和蛋白質(zhì)反應(yīng)，那么在檢測還原糖和蛋白質(zhì)時斐林試劑和雙縮脲試劑能否互換使用，與加入NaOH和CuSO4的量和先后順序有無關(guān)系呢？為了解答疑問，筆者分別做了還原糖和蛋白質(zhì)的檢測實驗。一、還原糖的檢測待測組織樣液：早酥梨研磨液實驗步驟與實驗結(jié)果：組別12345678組織樣液2ml早酥梨研磨液檢測試劑0.1%NaOH和0.

3、05%CuSO40.1%NaOH0.01%CuSO40.05%CuSO4試劑用量0.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；4滴CuSO44滴NaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；0.5mlCuSO40.5mlNaOH；1mlCuSO41mlCuSO4試劑使用順序NaOH和CuSO4混合先加NaOH后加CuSO4先加CuSO4后加NaOHNaOH和CuSO4混合NaOH和CuSO4混合NaOH和CuSO4混合NaOH和CuSO4混合

4、條件50~65℃水浴加熱現(xiàn)象磚紅色沉淀磚紅色沉淀磚紅色沉淀磚紅色沉淀（顏色淺）磚紅色沉淀棕色磚紅色沉淀（顏色淺）藍色結(jié)果分析：1.從1、2、3組實驗結(jié)果來看斐林試劑中無論NaOH和CuSO4混合使用，還是先加NaOH后加CuSO4，或者先加CuSO4后加NaOH都會出現(xiàn)磚紅色沉淀，并且顏色差異不明顯；2.比較1、4、5組結(jié)果，CuSO4的用量對顏色深淺的影響較大，而NaOH的用量對顏色影響不明顯；3.分析1、6、7組結(jié)果，適當提高質(zhì)量濃度為0.01%CuSO4的用量也可以出現(xiàn)磚紅色沉淀。結(jié)論：1.用斐林試劑和雙縮脲試劑都能檢測還原糖；2.

5、檢測還原糖時與NaOH和CuSO4使用順序沒有太大關(guān)系；3.如果不營造堿性環(huán)境，不會出現(xiàn)磚紅色；1.在堿性環(huán)境中，如果Cu2+的濃度過低，不會出現(xiàn)磚紅色，隨著Cu2+濃度的提高逐漸出現(xiàn)磚紅色，并且顏色會逐漸加深。二、蛋白質(zhì)的檢測待測組織樣液：蛋清稀釋液實驗步驟和實驗結(jié)果：組別1234567組織樣液2ml蛋清稀釋液檢測試劑0.1%NaOH和0.01%CuSO40.1%NaOH0.05%CuSO40.01%CuSO4試劑用量1mlNaOH；2滴CuSO40.5mlNaOH；2滴CuSO43滴NaOH；2滴CuSO41mlNaOH；2滴CuSO

6、41滴NaOH；2滴CuSO43滴NaOH；2滴CuSO42滴CuSO4試劑使用順序先加NaOH后加CuSO4NaOH和CuSO4混合先加CuSO4后加NaOH先加NaOH后加CuSO4混合先加CuSO4后加NaOH先加CuSO4后加NaOH現(xiàn)象紫色紫色紫色紫色（深）紫色（深）紫色（深）藍色現(xiàn)象分析：1.從第7組結(jié)果得出如果不制造堿性環(huán)境，不會產(chǎn)生紫色；2.1、2、3組比較只要能制造堿性環(huán)境，都能出現(xiàn)紫色，與NaOH和CuSO4的添加順序無關(guān)；3.從4、5、6組可以看出斐林試劑也能檢測蛋白質(zhì)，而且紫色要比1、2、3組要深。結(jié)論：1.斐林試

7、劑和雙縮脲試劑都能檢測蛋白質(zhì)；1.無論先加NaOH還是先加CuSO4或者兩者混合加入都能產(chǎn)生紫色；2.使用0.05%CuSO4要比使用0.01%CuSO4產(chǎn)生的紫色顏色更深，更接近于藍色。原理分析：在堿性條件下，Cu2+氧化性增強，能夠氧化還原糖中的醛基，同時Cu2+被還原為磚紅色的Cu2O沉淀，只要保證營造堿性條件，有足夠多的Cu2+被還原為Cu2O就能出現(xiàn)磚紅色沉淀。雙縮脲試劑原本是檢測雙縮脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）的試劑，而蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CO-NH-）的結(jié)構(gòu)和雙縮脲的結(jié)構(gòu)非常相似，在堿性條件下與Cu2+產(chǎn)生紫色的絡(luò)合

8、物，所以可以用雙縮脲試劑檢測三肽或三肽以上的化合物，在堿性條件下Cu2+與蛋白質(zhì)中的肽鍵形成紫色的絡(luò)合物。實驗綜合分析：1.斐林試劑和雙縮脲試劑都能檢測還原糖和蛋白質(zhì)；2.在檢測還原糖時如果用