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《dns比色法測定還原糖及總糖實驗報告》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、DNS比色法測還原糖標準曲線繪制及測定Tr21培養(yǎng)液中初始和最終還原糖及總糖含量實驗報告1.研究背景木霉菌在發(fā)酵過程中，利用碳源導致發(fā)酵液中糖含量的變化，其中還原糖是一個主要的反映參數(shù)。還原糖與3，5-二硝基水楊酸（DNS）在堿性條件下生成棕紅色物質(zhì)（3-氨基-5-硝基水楊酸），在一定范圍內(nèi)，棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度與還原糖的含量呈一定的比例關(guān)系。糖含量的不同變化一定程度上體現(xiàn)著Tr21不同的生長階段，從而為控制及優(yōu)化發(fā)酵過程提供科學依據(jù)。2.實驗?zāi)康?，5-二硝基水楊酸比色法測定Tr21發(fā)酵液中還原糖含量，利用糖含量這個參數(shù)，控制發(fā)酵過程。3.實驗
2、原理在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水楊酸（DNS）與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物。在過量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在540nm波長處有最大吸收，在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系，利用比色法可測定樣品中的含糖量。黃色??桔紅色4.實驗材料發(fā)酵液（5天）：Tr121（A2）實驗材料：3，5-二硝基水楊酸，氫氧化鈉，苯酚，亞硫酸鈉，酒石酸鉀鈉，葡萄糖，蒸餾水實驗器材：可見分光光度計，電子天平，真空干燥箱，數(shù)顯恒溫水浴鍋，離心機，移液器，槍頭，500ML容量瓶，試管，500ml燒杯，1000ml量筒5.實驗方法5.
3、1試劑配制（1）1mg/ml葡萄糖標準溶液：準確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100ml，即含葡萄糖為1.0mg/ml。（2）3,5—二硝基水楊酸試劑：稱取6.3g3,5—二硝基水楊酸并量取262ml2mol/LNaOH加到酒石酸鉀納的熱溶液中（182g酒石酸鉀納溶于500ml水中），再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸氫鈉溶于其中，攪拌溶解，冷卻后定容到1000ml貯于棕色瓶中。（3）碘－碘化鉀溶液：稱取5g碘，10g碘化鉀溶于100ml蒸餾水中。（4）6NNaOH：稱取120gNaOH溶于500ml蒸餾水中。（5）0.1
4、%酚酞指示劑?！。?）6mol/LHCl溶液5.2、葡萄糖標準曲線制作取8支15mm×180mm試管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖標準液和蒸餾水。試劑管號012345678葡萄糖標準液(ml)00.20.40.60.81.01.21.41.6蒸餾水(ml)2.01.81.61.41.21.00.80.60.4水楊酸溶液(ml)1.51.51.51.51.51.51.51.51.5葡萄糖含量(mg)00.20.40.60.81.01.21.41.6將各管溶液混合均勻，在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻到室溫，再向每管加入21.5ml蒸餾水，
5、搖勻。λ=540nm處測定吸光度00.0770.20.3190.4240.5430.6550.7610.856以葡萄糖含量（mg）為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制標準曲線，如圖一：1.3.1培養(yǎng)液中初始總糖與還原糖的測定準確量取5ml培養(yǎng)液，定容至50ml，作為還原糖測定樣品液。準確量取1ml發(fā)酵液并加蒸餾水定容至10ml放在錐形瓶中，加入6mol/LHCl10ml，在沸水浴中加熱0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈現(xiàn)藍色。水解畢，冷卻至室溫后加入1滴酚酞指示劑，以6NNaOH溶液中和至溶液呈微
6、紅色，并定容到50ml，用于總糖測定。試劑空白還原糖總糖樣品溶液(ml)01.01.0蒸餾水(ml)2.01.01.0水楊酸(ml)1.501.501.50將各管溶液混合均勻，在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻到室溫，再向每管加入21.5ml蒸餾水，搖勻。λ=540nm處測定吸光度00.3110.228樣品溶液中還原糖和總糖00.5940.445.3.2發(fā)酵液中最終總糖與還原糖的測定發(fā)酵液2500rpm離心20min，取5ml，作為還原糖測定樣品液。準確量取5ml發(fā)酵液懸液放在錐形瓶中，加入6mol/LHCl5ml，在沸水浴中加熱0.5h，取
7、出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液檢查水解是否完全。如已水解完全，則不呈現(xiàn)藍色。水解畢，冷卻至室溫后加入1滴酚酞指示劑，以6NNaOH溶液中和至溶液呈微紅色，并定容到50ml，用于總糖測定。試劑空白還原糖總糖樣品溶液(ml)01.01.0蒸餾水(ml)2.01.01.0水楊酸(ml)1.501.501.50將各管溶液混合均勻，在沸水中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻到室溫，再向每管加入21.5ml蒸餾水，搖勻。λ=540nm處測定吸光度00.150.014樣品溶液中還原糖和總糖00.2990.05測定后，取樣品的光吸收值在標準曲線上查出相應(yīng)
8、的糖量。6.結(jié)果處理按下式計算出樣品中還原糖和總糖的濃度：還原糖濃度（g/ml）=m/V*稀釋倍數(shù)/1000
