杜仲葉中綠原酸、黃酮的提取、分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定

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1、1943688學(xué)校代碼：研究生學(xué)號(hào)：10264M070208212上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題英文題目：杜仲葉中綠原酸、黃酮的提取、分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定ResearchonChlorogenicacidandFlavonoidsfromEucommiaulmoidesleaves：Extraction，Isolation，PurificationandStructuralIdentification專(zhuān)業(yè)：食品科學(xué)與工程研究方向：天然活性物質(zhì)研究姓名：張玲指導(dǎo)教師：楊性民劉青梅教授二oo九年十二月十六日一㈣上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我

2、恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫(xiě)，我對(duì)所寫(xiě)的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：w和今日期：勱『口年弓月牛日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有

3、關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。，保密留，剄1年解密后適用本版權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密口學(xué)位論文作者簽名：硝拎指導(dǎo)教師簽名：矽曠鈕～R期：乏糾口年3月牛日日期：0叫薩F弓月午日答辯委員會(huì)成員名單姓名工作單位職稱(chēng)備注中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究楊憲時(shí)研究員主席院東海水產(chǎn)研究所周培根上海海洋大學(xué)教授委員吳文惠上海海洋大學(xué)教授委員汪之和上海海洋大學(xué)教授委員陶妍上海海洋大學(xué)教授委員曲映紅上海海洋大學(xué)講師秘書(shū)答辯地點(diǎn)2教305室答辯日期2010／1／19上海海洋大學(xué)碩上學(xué)位論文杜仲葉中綠原酸、黃酮的提取、分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定摘

4、要杜仲(EucommiaulmoidesOliv．)是具有保健功效的藥用植物，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，杜仲葉主要成分與杜仲皮相近，且具有等同藥理功效，為了進(jìn)一步分析杜仲葉中具體的功效因子。本文以杜仲葉為研究對(duì)象，通過(guò)對(duì)杜仲葉有效成分不同方法的提取、分離、純化研究；通過(guò)薄層色譜和紫外光譜分析，并經(jīng)電噴霧源一質(zhì)譜和核磁共振檢測(cè)對(duì)純化組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，旨在進(jìn)一步確定最佳提取分離方法，發(fā)現(xiàn)杜仲葉有效成分的分子結(jié)構(gòu)，為杜仲葉的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1．杜仲葉有效成分的提取分別采用回流法、超聲波法、微波法對(duì)杜仲葉中有效成分進(jìn)行提取。考察料液比、提取時(shí)間

5、、乙醇濃度、溶劑pH值、提取次數(shù)等因素對(duì)有效成分提取率的影響，經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)化，最終比較得出采用超聲波輔助回流提取法較好。最佳提取工藝為：料液比為1：10，提物溫度80。C，乙醇濃度30％，提取溶劑pH值為5，先超聲波提取30min，然后回流法提取30min，重復(fù)此操作1次。根據(jù)最優(yōu)工藝組合，稱(chēng)取5kg杜仲葉進(jìn)行擴(kuò)大試驗(yàn)，最終杜仲葉提取物的出粉率為24％，其中含綠原酸22．29％，含總黃酮54．67％。2．杜仲葉粗提物的分離純化首先從九種大孔樹(shù)脂中篩選出最佳的吸附樹(shù)脂為NKA．II，對(duì)綠原酸的靜態(tài)吸附量為17．17mg／g，吸附率為90．92％，解

6、吸率為75．63％，對(duì)總黃酮的靜態(tài)吸附量為49．16mg儋，吸附率為90．44％，解吸率為70．02％；然后通過(guò)靜態(tài)吸附．解吸試驗(yàn)表明，NKA．II樹(shù)脂屬于快速平衡型樹(shù)脂，靜態(tài)吸附4h后達(dá)到吸附飽和，最佳的吸附液pH值為4，用70％乙醇為解吸液可將綠原酸、黃酮類(lèi)化合物有效的洗脫下來(lái)；接著通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附．洗脫試驗(yàn)結(jié)果顯示，上樣液濃度為綠原酸0．9012mg／mL，總黃酮3．4406mg／mL；上樣液流速為1．0mL／min，上樣液體積不宜超過(guò)10倍的柱體積。根據(jù)小試驗(yàn)的優(yōu)化參數(shù)，進(jìn)行擴(kuò)大試驗(yàn)。稱(chēng)取6009杜仲葉粗提物，經(jīng)NKA．II大孔樹(shù)脂分離，依次

7、采用純凈水(18L)、30％乙醇(9L)、50％乙醇(15L)、70％乙醇(12L)、90％乙醇(3L)進(jìn)行梯度洗脫，得到三個(gè)組分依次為FA(64．939)、FB(36．069)和Fc(30．279)。其中FA含有大量的綠原酸類(lèi)物質(zhì)，F(xiàn)B中既含有綠原酸類(lèi)物質(zhì)又含有黃酮類(lèi)物質(zhì)，F(xiàn)c主要含黃酮類(lèi)化合物，故選用FA和Fc進(jìn)行純化。稱(chēng)取259的組分FA，采用乙醇一水(0％、10％、20％、30％、40％)梯度洗脫，經(jīng)聚酰胺柱分離得到三個(gè)組分FA-1、FA-2和FA．3，收集第21"--'70管洗脫液濃縮后，再經(jīng)SephadexLH．20樹(shù)脂純化得到組分F

8、A一2。稱(chēng)取259的組分Fc，采用乙醇-水(O％、30％、40％、50％、60％、70％、90％)梯度洗脫，經(jīng)聚酰胺柱分離得到五個(gè)組分F