奧曲肽對實驗性腦梗死大鼠腦保護作用及其機制的研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文奧曲肽對實驗性腦梗死大鼠腦保護作用及其機制的研究姓名：陳林玉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張祥建201203中文摘要奧曲肽對實驗性腦梗死大鼠腦保護作用及其機制的研究摘要目的：腦血管病是導(dǎo)致人類殘疾和死亡的主要原因之一。以缺血性腦卒中最為常見，約占所有腦血管病的80％～85％。腦缺血后繼發(fā)性腦損傷是病情加重及影響預(yù)后的重要因素，但其機制十分復(fù)雜，包括炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、Ca2+超載、線粒體功能障礙、細胞凋亡等等，其中氧化應(yīng)激在缺血性腦損傷的發(fā)生發(fā)展上起關(guān)鍵性作用。腦缺血時，產(chǎn)

2、生大量的活性氧簇／活性氮簇，遠遠超過了內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)的清除能力時，可使腦組織內(nèi)許多內(nèi)源性抗氧化酶活性降低，繼而引起腦組織損傷。近年研究顯示Nuclearfactorerythroid2relatedfactor2(Nrf2)／antioxidantresponseelement(ARE)信號通路是細胞抗氧化應(yīng)激和防御親電子物質(zhì)攻擊的主要機制之一。生理情況下，Nrf2與Keapl結(jié)合以非活性形式存在于胞漿內(nèi)，氧化應(yīng)激或親電子物質(zhì)攻擊可以引起Nrf2／Keapl復(fù)合物關(guān)鍵部位的構(gòu)象改變，二者解偶聯(lián)，活化的Nrf

3、2轉(zhuǎn)運入細胞核，在細胞核內(nèi)Nrf2與ARE上相應(yīng)位點結(jié)合，啟動ARE調(diào)控的靶基因的表達。Nrf2／ARE通路激活后，可誘導(dǎo)多種解毒酶的表達，提高抗氧化物質(zhì)的表達水平，清除活性氧和親電子物質(zhì)，增強細胞的抗氧化能力。最近動物實驗和臨床研究發(fā)現(xiàn)奧曲肽(Octreotide)對心肌梗死及擴張性心肌病有保護作用，并且可通過抗氧化機制保護肝臟、胰腺及視網(wǎng)膜等多個臟器的缺血再灌注損傷，對大鼠抑郁癥狀也有改善作用。但有關(guān)奧曲肽在腦梗死急性期的神經(jīng)保護作用及其機制的研究很少。本實驗成功建立了大鼠永久性大腦中動脈閉塞(perma

4、nentmiddlecerebralarteryocclusion，pMCAO)模型，并應(yīng)用奧曲肽進行干預(yù)，觀察奧曲肽對腦梗死的保護作用及其對Nrf2、II相酶血紅素加氧酶HO．1(heineoxygenase一1)與脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA(Malondiadehyde)的影響。方法：采用健康成年雄性Spmgue．Dawley大鼠，按照改良的Longa線栓法建立右側(cè)pMCAO動物模型。實驗動物隨機分為假手術(shù)組(Sham)、對照組(MCAO)、奧曲肽低劑量組(MCAO+octreotide50／ag／kg，OCT

5、—L)、奧曲肽高劑量組(MCAO+octreotide100pg／kg，中文摘要OCT．H)。藥物干預(yù)組動物于大腦中動脈閉塞后立即腹腔注射奧曲肽。Sham組和MCAO組于MCAO術(shù)后立即腹腔注射等容量生理鹽水。并于術(shù)后24小時采用改良的Longa評分法對大鼠進行神經(jīng)功能評分，2分．4分者納入實驗組。完畢后將大鼠斷頭處死，留取病變側(cè)腦組織應(yīng)用干濕重法測定腦含水量，用2％2，3，5．三苯基四唑氮紅(triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色測定腦梗死體積，用免疫組織化學(xué)和蛋白印記法(W

6、esternbloting方法)分別測定Nrf2和HO．1的表達情況，采用試劑盒應(yīng)用酶標儀檢測大腦皮層梗塞灶丙二醛(Malondiadehyde，MDA)的含自里。結(jié)果：1Sham組未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損，而MCAO組、奧曲肽低劑量組和奧曲肽高劑量組大鼠均出現(xiàn)不同程度的左側(cè)肢體偏癱。奧曲肽高劑量組的神經(jīng)功能評分明顯低于MCAO組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。奧曲肽低劑量組與MCAO組相比，神經(jīng)功能評分無明顯差異。2Sham組右側(cè)腦組織含水量為79．49％±0．40％，腦梗塞后腦組織含水量明顯升高，MCAO組

7、病變側(cè)腦組織含水量為85．314-0．93％。給予奧曲肽干預(yù)后，低劑量組和高劑量組病變側(cè)腦組織含水量均明顯降低，與MCAO組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(MCAOgroupVS．OCT—Lgroup：85．314-O．93％VS．84．004-0．74％，尸<0．05；MCAOgroupVS．OCT-Hgroup：85．3l4-0．93％VS．82．934-1．00％，P<0．05)。病變對側(cè)腦組織含水量無差異(戶>0．05)。3Sham組無梗死灶。與MCAO組相比，奧曲肽高劑量組梗死體積明顯減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

8、OCT．Hvs．MCAO：30．56％±4．01％VS．43．16％±2．32％，P0．05)。4腦缺血后奧曲肽高劑量組Nrf2及HO．1陽性細胞數(shù)增多，蛋白表達升高，與MCAO組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(戶