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《豬乙型腦炎病毒sc株的分離鑒定及其部分生物學特性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，學位論文中不包含其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：矽燁年占月／沙日，關于論文使用授權的聲明本人完全了解四川農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或
2、掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意四川農業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。f圈本論文不保密。口本論文保密，在一年解密后適用本授權。(請在以上口內劃“4”)研究生簽名：導師簽名：瀘，5f年多月／≥目Ⅵ夕吖年易月，Z,-I習、易秘弧萬方數(shù)據(jù)中文摘要豬乙型腦炎又稱之為日本乙型腦炎(Japaneseencephalitis)，是由日本乙型腦炎病毒(．1apaneseencephalilisvirus，JEV)引起的一種人畜共患急性傳染病。JEV感染主要引發(fā)豬繁殖障礙疾病，接種豬乙型腦炎病毒滅活疫苗能有效預防和控制該病。本研究從
3、疑似豬乙型腦炎的臨床病料中分離到1株JEV病毒，對其進行了生物學鑒定和適應性培養(yǎng)研究，并使用所培養(yǎng)的細胞適應株作為免疫原成功制備了JEV的兔源高免血清。取流產胎兒腦組織經處理后接種BHDS31細胞，每日觀察細胞病變，連續(xù)觀察5天，然后連續(xù)盲傳。JEV分離株盲傳至第6代開始產生細胞病變，接種細胞36h觀察到輕微的細胞病變，48h時，細胞病變達80％。針對JEV的E基因設計特異性引物，對盲傳后的病毒液進行JEV的檢測。結果表明使用所建立的JEVRT-PCR檢測方法對產生細胞病變的分離株進行檢測擴增出特異性條帶，由此表明使用BHK21細胞成功分離到一株JEV病毒
4、，將其命名為JEV．SC株。將檢測為陽性的JEV繼續(xù)傳代使其適應BHK21細胞，待出現(xiàn)細胞病變后通過蝕斑實驗對所分離的病毒進行純化。對純化后的病毒以及不同代次的JEV分離毒株進行TCID50的測定，分析不同代次毒株在BHK．21細胞上的適應性。并將其接種VERO細胞，比較JEV分離株在不同細胞上的增值特性。然后使用在BHK21上穩(wěn)定傳代的JEV分離株作為抗原，免疫家兔，制備兔源高免血清。使用蝕斑實驗對JEV—SC株進行純化并連續(xù)傳代，連續(xù)傳代至10代后可以觀察到穩(wěn)定的細胞病變，測得JEV—SC株的TCID50為107．21／ml。將JEV．SC株分別接種V
5、ero細胞和BHK一21細胞，結果顯示Vero細胞接種JEV—SC株后12h～48h出現(xiàn)細胞病變，隨著時間的延長細胞病變數(shù)量逐漸增加，接種84h后病變細胞達到90％。BHK21細胞接種后24h可以觀察到細胞病變，病變特征與VERO細胞類似，接種細胞后約60h病變細胞達到90％。以上結果表明JEV—SC株在BHK21細胞上病變較VERO細胞明顯，更適于該病毒的培養(yǎng)。將JEV．SC株接種BHK21細胞后不同時間收集培養(yǎng)上清測定上清中病毒含量，結果顯示病毒滴度在8h～40h期間呈上升趨勢，在40h～64h期間趨于穩(wěn)定且在56h左右達到最大值，㈣筍舢1～刪1～㈣呈
6、刪1～ⅢO～㈣J～萬方數(shù)據(jù)64h以后病毒滴度開始下降。使用適應性培養(yǎng)的JEV-SC株作為免疫原免疫家兔后成功獲得了JEV兔源高免血清，瓊脂糖擴散實驗證實所制備的高免血清效價為1：32。關鍵詞：豬乙型腦炎病毒；分離；鑒定；適應性培養(yǎng)；萬方數(shù)據(jù)Isolation，IdentificationandprimaD"BiologcalCharacterizationofPorcineEncephalitisVirusSCStrainMasterofVeterinaryWangYun(MasterofVeterinary)DirectedbyXuZhiwen(Prof
7、essor)(SichuanAgricultureUniversity，Ya’an，Sichuan，P．R．China，625014)AbstractPorcineencephalitisisalsoknownasJapaneseencephalitiswhichisanacuteinfectiouszoonotic．JapaneseencephalitisvirUSistheantigens，mainlycauseporcinereproductivedisorders，vaccinatedswineJapaneseencephalitisvirusva
8、ccinecaneffectivelypreventandcont
