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《核桃della蛋白編碼基因的克隆及分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文核桃DELLA蛋白編碼基因的克隆及分析姓名：宋曉波申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：張志華20120531摘要核桃(JuglansregiaL．)樹高常達10—25m，干徑可達1m左右，冠幅直徑6．16m，屬落葉喬木，是我國重要的經(jīng)濟樹種。目前核桃栽培大多采用大冠稀植和喬化密植，導(dǎo)致樹冠大，栽培管理困難，樹冠郁閉，影響通風(fēng)透光，果實品質(zhì)差，經(jīng)濟效益低。矮化栽培因具有結(jié)果早、品質(zhì)好、管理方便、品種更新快等優(yōu)點，已成為果樹業(yè)發(fā)展的趨勢。本試驗以矮化型核桃品種‘遼寧2號’為試材，通過同源克隆和RACE技術(shù)克隆得到了核桃DELLA蛋白編碼基因的eDNA全長，并通過生物信
2、息學(xué)軟件進行了分析，旨在從分子水平研究果樹的矮化機理，為核桃的矮化育種工作奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：．1．根據(jù)已知的DELLA蛋白編碼基因的保守序列設(shè)計引物，以‘遼寧2號’核桃嫩葉eDNA為模板，擴增得到長為449bp的一段eDNA片段，通過Blasm比對，該片段與葡萄的DELLA蛋白編碼基因(Genebank：EFl41255)同源性達到81％。該片段編碼149個氨基酸，Blastp比對結(jié)果顯示：該氨基酸片段同小金海棠(Genebank：ADH53781)和蘋果(Genebank：ADH53780)的DELLA蛋白同源性最高分別為92％和91％。證明克隆得到序列為DELLA蛋白編碼基因的一部
3、分。2．在此序列的基礎(chǔ)上進行3’端和5’端RACE擴增。最終獲得到2，361bp的cDNA全長序列，包含1，842bp的完整的開放閱讀框(ORF)，158bp的57非翻譯區(qū)，349bp3’非翻譯區(qū)及12bp的polyA。將該基因命名為JrGAI(Genebank：JF766606)。3．該基因編碼的DELLA蛋白包含613個氨基酸(Genebank：AEE69074)，推測其分子量為66．78kDa。同源性分析結(jié)果表明該蛋白與其他物種DELLA蛋白高度相似，與毛果楊關(guān)系最近，相似度達98％。對其氨基酸序列進行生物信息學(xué)分析，將其與毛果楊、番茄、五葉地錦和擬南芥進行多重比對，發(fā)現(xiàn)不同物種DEL
4、LA蛋白的氨基酸序列在N端的同源性總體上不高，但存在DELLA和TVHYNP兩個非常保守的酸性結(jié)構(gòu)域，中部有一個核定位信號結(jié)構(gòu)域(NLS)RKVATYFGLARR，C端有RVER和SAW兩個保守結(jié)構(gòu)域。證明核桃的DELLA蛋白具有同其他物種相似的功能。關(guān)鍵詞：核桃；DELLA；基因克隆；RACE技術(shù)；生物信息學(xué)MolecularCloningandAnalysisiofaDELLAGenefromJuglansregiaL．Author：SongxiaoboAdvisor：ZhangZhihuaMajor：PomologyAbstractWalnut(JuglansregiaL．)，them
5、aineconomictreeinChina．Tllemainbolesizeofwalnutisusuallyfrom10to25m，itsdiametercarlbeaboutlm，anddiameterofthetreecrownisfrom6to16m．Walnutbelongtodeciduousarborsandusuallyapplysbigcrownthinlyplantsandvigoratingcompactplanting，leadingtobigtreecrownanddifficultcultivatedmanagement．Whatismore，thetreecr
6、ownclosureinfluencetheventilationandlucency,leadingtofruitwithlowqualityandloweconomicreturns．Dwarfingculturehaslotofadvantages，suchasfastgrowth，goodquality,convenientmanagement，fastrenovationofvarietyetc．Ithasbecomethetendencyoffruitindustry．Inthisexperiment，thefull—lengtheDNAcodingDELLAproteinswa
7、sgotbyhomologouscloningandRACEtechniquefrom‘LiaoningNo．2’oneofthedwarfwalnutspecies，inordertoinvestigatethedwarfmechanisminmolecular1evel，furthermore，settlethegroundworkforthedwarfbreedingwork．Themainresult
