利用基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)創(chuàng)造抗病大豆新材料

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1、————F了一一摘罩邑????????????????????????????????????????????????????I英文摘要?????????????????????????????????????II1前言?????????????????????????????????????11.1研究目的及意義???????????????????????????????.11.2文獻(xiàn)綜述??????????????????????????????????..11.2.1作物抗病育種現(xiàn)狀??????

2、???????????????????????.11.2.2植物抗病基因工程的研究進(jìn)展????????????????????????21.2.3轉(zhuǎn)基因大豆研究進(jìn)展????????????????????????????81.2.4大豆遺傳轉(zhuǎn)化方法?????????????????????????????91.2.5再生系統(tǒng)????????????????????????????????。122材料與方法??????????????????????????????????..132.1材料???????

3、?????????????????????????????????????????132.1.1菌株與質(zhì)粒???????????????????????????????。132.1.2受體材料????????????????????????????????..132.1.3生化試劑????????????????????????????????..132.1.4培養(yǎng)基??????????????????????????????????142.1.5儀器??????????????????????????

4、????????????????????。l42.2試驗(yàn)方法??????????????????????????????????152.2.1植物表達(dá)載體pDT-hrpZ構(gòu)建????????????????????????152.2.2大豆再生體系的建立????????????????????????????172.2.3用基因槍法轉(zhuǎn)化大豆體細(xì)胞胚???????????????????????.182.2.4抗性植株分子生物學(xué)檢測(cè)?????????????????????????.203結(jié)果與分析???

5、???????????????????????????????.253.1pDT-hrpZ表達(dá)載體的構(gòu)建??????????????????????????253.2大豆再生體系的建立?????????????????????????????263.2.1不同基因型對(duì)大豆體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的影響???????????????????263.2.2優(yōu)異基因型品種胚胎發(fā)生的特點(diǎn)??????????????????????。273.3基因槍介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化????????????????????????????283

6、.4轉(zhuǎn)基因植株分子生物學(xué)檢測(cè)??????????????????????????293.4.1To代轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)????????????????????????293.4.2轉(zhuǎn)基因大豆及對(duì)照總RNA的提取?????????????????????..3l3.4.3To代轉(zhuǎn)基因植株hrpZ表達(dá)量的real.timePCR檢測(cè)??????????????.3l4討{侖?????????????????????????????????????????????????..34東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論

7、文4.1大豆未成熟子葉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的主要影響因素?????????????????一344.2基因槍轟擊大豆體細(xì)胞胚的影響因素??????????????????????354.3標(biāo)記基因選擇????????????????????????????????354.4液體篩選優(yōu)點(diǎn)????????????????????????????????.354.5下一步工作展望???????????????????????????????355結(jié)論??????????????????????????????????

8、???????????????。365.1構(gòu)建了含hrpZ基因植物表達(dá)載體???????????????????????365.2篩選出體細(xì)胞胚分化率較高的基因型大豆???????????????????.365.3獲得了轉(zhuǎn)HrpZ基因大豆植株?????????????????????????36致謝??????????????????????????????????????????????????.38參考文獻(xiàn)??????????????

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