巨型艾美耳球蟲hf株的鑒定及其對(duì)雞生理生化指標(biāo)的影響

《巨型艾美耳球蟲hf株的鑒定及其對(duì)雞生理生化指標(biāo)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文巨型艾美耳球蟲HF株的鑒定及其對(duì)雞生理生化指標(biāo)的影響姓名：孫偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：李培英；徐前明201206摘要雞球蟲病是由艾美耳屬球蟲寄生于雞腸上皮細(xì)胞內(nèi)所引起的一種原蟲病，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。臨床上雞球蟲病一般由兩種或兩種以上的球蟲混合感染所致。本試驗(yàn)采用玻璃紙單卵囊分離法成功分離到一株球蟲，并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，最終確定為巨型艾美耳球蟲合肥(心)株；用所獲球蟲感染雛雞，對(duì)其感染后不同階段雛雞生理生化指標(biāo)的變化進(jìn)行研究。首先，采集合肥市肥西縣某雞場(chǎng)具有球蟲病典型癥狀的雞糞樣，用飽和鹽水漂浮法分離艾

2、美耳球蟲混合毒株，顯微鏡檢查有無巨型艾美耳球蟲卵囊。對(duì)含有巨型艾美耳球蟲的卵囊液，加入20倍體積的2．5％重鉻酸鉀溶液，置于28℃恒溫培養(yǎng)，待完全孢子化后，準(zhǔn)備進(jìn)行巨型艾美耳球蟲的單卵囊分離。以玻璃紙作為載體分離單卵囊：首先將卵囊液稀釋，沾取一滴至0．5cm×0．5cm玻璃紙上，根據(jù)卵囊的形態(tài)學(xué)特征，初步選擇僅有1個(gè)卵囊的玻璃紙作為備用，然后用空殼膠囊進(jìn)行包裹，將其經(jīng)口接種至20只5日齡的雛雞。接種后第5天開始收集糞樣，并對(duì)其感染情況進(jìn)行檢查。其次，對(duì)單卵囊接種獲得的球蟲進(jìn)行增殖，即將上述單卵囊后代接種至12日齡的雛雞，自接種120h后，每小時(shí)做一次球蟲糞便學(xué)檢查，并記

3、錄第一次出現(xiàn)球蟲的時(shí)間，用沉浮法收集球蟲卵囊，測(cè)定最短孢子化時(shí)間。再次，對(duì)卵囊液進(jìn)行濃縮，按照常規(guī)DNA抽提法進(jìn)行球蟲DNA的抽提。根據(jù)Yao．ChiSu等設(shè)計(jì)的巨型艾美耳球蟲特異性引物：E．M1：5’．TTGTGGGGCA1’ATTGTG一3’；E．M2：5’一CAATGAGGCACCACATGTCT-3’進(jìn)行PCR反應(yīng)。對(duì)所擴(kuò)增的基因進(jìn)行測(cè)序，并進(jìn)行比對(duì)分析。最后，將巨型艾美耳球蟲(耶)株按照5×104個(gè)／只的劑量感染80只21日齡雛雞，選擇感染后0d，7d，11d，15d心臟采血，測(cè)定平均體重和免疫器官指數(shù)、血液成分以及免疫等指標(biāo)。結(jié)果表明：(1)采用單卵囊技術(shù)分

4、離艾美耳球蟲并對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物感染，在20只雞中有6只感染成功，其感染率達(dá)30％；(2)對(duì)單卵囊所分離的艾美耳球蟲進(jìn)行增殖，其第二代卵囊(按50個(gè)計(jì)算)大小為27．51～36．68斗而×20．96～31．44¨m，平均為32．18岬×25．84岬，卵形指數(shù)為1．25，潛隱期為130h，最短孢子化時(shí)間為35h。將單卵囊后代(第一代)與增值后(第二代)的球蟲卵囊大小進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)(F檢驗(yàn))，結(jié)果顯示差異不顯著(尸>0．05)，表明第二代球蟲與第一代卵囊大小相同，且球蟲卵囊大小、潛隱期和最短孢子化時(shí)間均符合巨型艾美耳球蟲的特征。因此，初步鑒定本試驗(yàn)分離的蟲株為巨型艾美耳球蟲，暫

5、命名為巨型艾美耳球蟲合肥(HF)株；(3)采用分子生物學(xué)方法進(jìn)一步對(duì)所增殖卵囊進(jìn)行鑒定時(shí)，成功擴(kuò)增出15lbp的特異性片段。序列分析顯示，所擴(kuò)增的基因與己報(bào)道的巨型艾美耳球蟲同一基因有高度的同源性；(4)動(dòng)物試驗(yàn)顯示：攻蟲后7d，法氏囊指數(shù)顯著下降(尸

6、05)，單核細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和IgG極顯著升高(尸0．05)。綜上所述，本研究成功地優(yōu)化了一種球蟲單卵囊分離

7、技術(shù)，應(yīng)用此技術(shù)分離到一株艾美耳球蟲，對(duì)該株球蟲進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定為巨型艾美耳球蟲(HF)株；用該株球蟲感染雛雞，測(cè)定其感染后生理生化指標(biāo)，初步探明了巨型艾美耳球蟲(HF)株感染雛雞后不同階段生理生化指標(biāo)的變化規(guī)律。球蟲單卵囊玻璃紙膠囊分離技術(shù)的建立為純種球蟲的獲取提供了一種新方法，巨型艾美耳球蟲HF株的鑒定及其對(duì)雞生理生化指標(biāo)的影響的研究結(jié)果可為合肥地區(qū)雞球蟲病的防治提供理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：雞，巨型艾美耳球蟲，單卵囊分離技術(shù)，鑒定，生理生化指標(biāo)AbstractChickencoccidiosisiscausedby歷mP，