鹽酸小檗堿對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝的作用及機(jī)制探討

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽酸小檗堿對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝的作用及機(jī)制探討姓名：于書雷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：馮麗英201203中文摘要鹽酸小檗堿對(duì)大鼠非酒精性脂肪性肝病的作用及機(jī)制探討摘要非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)是一種無過量飲酒史，由各種原因引起的以肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積為主要特征的臨床病理綜合征。目前發(fā)現(xiàn)肥胖，2型糖尿病，高脂血癥等因素單獨(dú)或共同構(gòu)成了NAFLD的易感因素。近年來隨著人們生活水平的不斷提高，NAFLD以高發(fā)病率，低齡化趨勢(shì)日益受到人們的重視。目前己成為全球普遍關(guān)注的醫(yī)學(xué)

2、問題和社會(huì)問題。然而對(duì)于NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚無明確闡述，有研究發(fā)現(xiàn)胰島素抵抗(insulinresistance，IR)，脂質(zhì)代謝紊亂，炎性因子及內(nèi)毒素等在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。但目前對(duì)其尚無確切的有效治療藥物。鹽酸小檗堿(Berberinehydrochloride，BBR)即黃連素，作為治療腸道感染性疾病的藥物，近年來研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)降低血糖，改善IR；調(diào)節(jié)脂質(zhì)異常等作用。并且其具有藥源廣泛，價(jià)格低廉，副作用小等優(yōu)點(diǎn)。所以本實(shí)驗(yàn)通過高脂喂養(yǎng)建立大鼠NAFLD模型，并應(yīng)用BBR對(duì)其進(jìn)行干預(yù)治療，以探討B(tài)BR對(duì)大鼠NAFLD的治療效果及其可能的作用機(jī)制。為今

3、后BBR在脂肪肝及降糖、降脂等作用的研究奠定基礎(chǔ)。目的：高脂飲食建立NAFLD模型，給予BBR干預(yù)治療。觀察BBR對(duì)大鼠模型體重、肝指數(shù)、肝功能、血脂、IRJ：旨數(shù)、TNF．Q以及對(duì)肝臟病理學(xué)變化的影響。并探討鹽酸小檗堿防治NAFLD的作用機(jī)制。方法：1．將36只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為以下2組：正常組(n=lO)和高脂造模組(n=26)。兩組大鼠自由飲水進(jìn)食，正常組給予普通飼料喂養(yǎng)，高脂造模組給予高脂飼料喂養(yǎng)(84％普通飼料+lO％豬油+5％蛋黃粉+1％膽固醇)。連續(xù)喂養(yǎng)12周，每周定時(shí)稱量大鼠體重1次。所有大鼠均在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院消化內(nèi)科動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室

4、飼養(yǎng)，環(huán)境溫度為25±2℃、明暗各12h。大鼠喂養(yǎng)12周末，正常組及高脂組各隨機(jī)取2只大鼠處死，取肝組織，常規(guī)行HE染色，光鏡下觀察肝組織病理學(xué)變化，確認(rèn)大鼠脂肪肝造模成功。中文摘要2．造模成功后將高脂造模組大鼠再隨機(jī)分為模型組(n=8)、BBRd,齊U量組(n=8)、BBR大劑量組(n=8)。BBR應(yīng)用蒸餾水充分混懸，BBR大、小劑量組分別給予BBR300m∥(kg·d)和150m∥(kg·d)灌胃，并繼續(xù)給予高脂飲食。同時(shí)正常組和模型組大鼠均給予等體積蒸餾水灌胃。灌胃時(shí)間為每日上午9：00．10：00。持續(xù)灌胃4周，于4周末統(tǒng)一處死大鼠，處死前一晚禁食水12

5、小時(shí)。3．觀察大鼠毛發(fā)和行為情況，電子天平稱取大鼠體重、肝濕重，并計(jì)算肝指數(shù)=(旰濕重／體重X100％’))。各組動(dòng)物經(jīng)10％水合氯醛腹腔注射麻醉后處死，無菌無致熱源條件下于下腔靜脈采血5ml，將血液置于離心機(jī)內(nèi)，3000r／min離心15分鐘，分離血清用于：(1)鱟試劑法測(cè)定血清內(nèi)毒素水平。(2)放射免疫法測(cè)定空腹血清胰島素(FINS)含量，并計(jì)算穩(wěn)態(tài)模式評(píng)估法胰島素抵抗指數(shù)(HOMA．IR)：HOMA．IR=((FPG×FINS)／22．5。(3)采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)

6、、高密度脂蛋白(HDL)、空腹血糖(FPG)等各項(xiàng)生化指標(biāo)。4．取肝左葉約lcm×lcmx0．5cm肝組織固定于4％甲醛溶液中，石蠟包埋，切片，HE染色用以觀察肝臟病理變化。取19肝組織放于EP管中，低溫冰箱保存，用于制備肝組織勻漿，采用WestemBlm方法測(cè)定肝組織TNF．a(chǎn)含量。結(jié)果：1．各組大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù)的變化情況：12周末行HE染色，確定NAFLD大鼠造模成功。16周末模型組大鼠體重(570．9士13．4)、肝濕重(19．82士2．47)，并計(jì)算出肝指數(shù)(3．48士0．46％)均明顯高于正常對(duì)照組的體重(507．4士11．7)、肝濕重(12．

7、91士0．78)及肝指數(shù)(2．55士0．16％)(均P

8、2．38+3．78)和(