特發(fā)性炎癥性肌病肌組織中腺苷及腺苷受體的分析

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1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文特發(fā)性炎癥性肌病肌組織中腺苷及腺苷受體的分析姓名：遇曉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：焉傳祝2012-11-15山東大學(xué)博士學(xué)位論文特發(fā)性炎癥性肌病肌組織中腺苷及腺苷受體的分析博士研究生：遇曉專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)博士生導(dǎo)師：焉傳祝教授論文摘要研究背景和目的特發(fā)性炎癥性肌病(IIMs)是一組非感染性炎癥性肌病，以骨骼肌中炎癥細(xì)胞浸潤及肌纖維萎縮、壞死為主要病理特征，其原因和發(fā)生機(jī)制不清。以多發(fā)性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)和包涵體肌炎(I酬)3個(gè)亞型最為多見。腺苷是細(xì)胞自分泌或旁分泌途徑中的信號分子，在維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定

2、方面起重要作用。腺苷可以抑制氧化爆發(fā)和腫瘤壞死因子Q等炎癥因子，在調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)方面起重要作用，在敗血癥患者和克隆恩病動物模型中均發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外腺苷水平升高。腺苷主要通過與其受體結(jié)合起作用，腺苷受體檢測是判斷腺苷發(fā)揮抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。腺苷受體(AR)分四型：A。AR、A趴AR、A4R、A擅R，均為G蛋白偶聯(lián)的七跨膜受體。LyngeJ等采用免疫組織化學(xué)法和western-blotting法檢測人類骨骼肌腺苷受體A。AR、A舶R和A2BAR的分布，結(jié)果觀察到骨骼肌僅表達(dá)A孫AR和A玨AR，肌纖維膜和胞漿中均有表達(dá)，而A，AR不表達(dá)

3、。1993年SajjadiFG等采用RT—PCR技術(shù)對A小R進(jìn)行克隆和序列分析，發(fā)現(xiàn)A扭R在人的骨骼肌組織幾乎不表達(dá)。細(xì)胞外腺苷的來源：一方面，腺苷單磷酸(AMP)在細(xì)胞外的5’一核苷酸酶(CD，。)作用下脫磷酸產(chǎn)生腺苷。AMP來自于細(xì)胞外的腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)在三磷酸核苷脫磷酸酶(NTPDase)等作用下脫磷酸生成。細(xì)胞外的NTPDases有多種，C％是細(xì)胞外主要的腺苷酸脫磷酸酶，CD騮L。也是一種常見的細(xì)胞外的NTPDase。另一方面，炎性細(xì)胞釋放腺苷，也是細(xì)胞外腺苷的重要來源。因此，我們檢測A孫AR、A小R和A

4、3AR在人骨骼肌纖維的表達(dá)，IIMs患者肌肉組織腺苷受體表達(dá)以及細(xì)胞外腺苷生成相關(guān)酶表達(dá)的變化，探討腺苷途山東大學(xué)博士學(xué)位論文徑作為肌肉組織的自身保護(hù)機(jī)制在炎癥性肌病狀態(tài)下的改變，為IIMs的治療探索新的方向。研究對象與方法選取臨床有肌無力癥狀但肌活檢病理無神經(jīng)肌肉損害表現(xiàn)者17例，四肢來源的骨骼肌14例，豎脊肌3例檢測AR表達(dá)。收集30例IIMs患者骨骼肌活檢組織標(biāo)本，其中DM患者15例、PM患者11例、IBM患者4例，肌活檢大致正常者14例(活檢部位均為四肢骨骼肌)作為正常對照，F(xiàn)SHD患者5例作為炎癥特異性對照。對肌活檢組織行wes

5、tern印跡分析、免疫組織化學(xué)染色，比較IIMs患者A孫AR、A：BAR、A擅R以及細(xì)胞外腺苷生成相關(guān)酶CD，。、CD。。、CD∞L。與正常對照的差別。采用SPSSl7．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(；±曲表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用student芒檢驗(yàn)；分類資料進(jìn)行x2檢驗(yàn)，頻數(shù)

6、無明顯著色，間質(zhì)和血管無明顯著色；A：小R抗體免疫熒光染色陽性主要見于1型肌纖維胞漿；A出R抗體免疫熒光染色陽性主要見于2型肌纖維胞漿和血管平滑肌，2型肌纖維胞漿熒光強(qiáng)度+，血管平滑肌熒光強(qiáng)度+++，肌纖維膜無明顯著色。3．Western印跡分析顯示3例豎脊肌AnAR、A。dR、A。AR條帶均較四肢骨骼肌的相應(yīng)條帶寬。4．IIMs患者非壞死纖維A。．AR、A。小R和AnR抗體免疫熒光染色較正常對照增強(qiáng)；westernblot分析A：。AR、A：嘏R條帶灰度值較正常對照增加，A4R條帶灰度值較正常對照無顯著差別。部分壞死肌纖維A擔(dān)R抗體免疫

7、熒光染色呈強(qiáng)熒光反應(yīng)。5．細(xì)胞外腺苷生成相關(guān)酶CD，。抗體染色見于炎癥部位的肌筋膜、肌內(nèi)膜和部分形態(tài)正常肌纖維內(nèi)膜，非炎癥部位的肌間質(zhì)中也有深染；CD。。和CD∞L．抗體染色在肌纖維無著色，CD∞陽性見于血管內(nèi)皮細(xì)胞，CD∞L。陽性見于肌內(nèi)末梢神經(jīng)周圍和肌梭內(nèi)。山東大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)論1．微量肌肉組織western印跡分析證實(shí)人骨骼肌表達(dá)k、k和A。型腺苷受體。2．A舶R表達(dá)于肌纖維膜，A：小R主要表達(dá)于1型肌纖維胞漿，AnR表達(dá)于2型肌纖維胞漿和血管平滑肌。3．豎脊肌如、A拈和A3型腺苷受體表達(dá)量較四肢骨骼肌更高。4．western印跡

8、顯示IIMs患者A烈AR、A。BAR表達(dá)增加，AAR表達(dá)不增加；而抗體免疫熒光染色顯示IIMs患者非壞死肌纖維A雄R、A：毋R和A姐R表達(dá)均增加，可能與炎癥損傷和糖皮質(zhì)激素應(yīng)用導(dǎo)致2型肌纖維數(shù)