芍藥花抗氧化和抗炎活性成分的提取與分離

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1、陳曼麗芍藥花抗氧化和抗炎活性成分的提取物與分離芍藥花抗氧化和抗炎活性成分的提取與分離研究生：陳曼麗導師：金英善副教授摘要芍藥(PaeonialactifloraPall．)屬毛茛科多年生宿根草本植物，原產于東南亞，生長在干燥的石質山坡、河堤和稀疏林地邊緣。芍藥根作為一種傳統(tǒng)中藥具有很長的歷史，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗氧化、抗癌、抗抑郁、抗肝臟纖維化等作用；對自身免疫疾病、心腦血管疾病以及神經(jīng)退行性疾病也能起到改善和治療作用。芍藥花無毒，可以鮮食，具有一定的食療作用。本研究的目的是評估芍藥花的抗氧化和抗炎活性，分離鑒定芍藥花中的生物活性物質，為芍藥花進一步綜合應用于醫(yī)藥以及開發(fā)新型功能食品

2、提供參考依據(jù)。1．芍藥花提取物的抗氧化活性采用酒石酸亞鐵比色法測定芍藥花提取物的總酚含量，結果表明芍藥花五種提取物中均含有一定量多酚類物質，其中甲醇提取物總酚含量最高，為44．35mg／g。采用DPPH自由基清除實驗、羥自由基清除實驗以及超氧陰離子自由基清除實驗評估芍藥花提取物的抗氧化活性。原提取液稀釋100倍時，芍藥花水提取物和甲醇提取物的DPPH自由基清除活性分別為92．33％和90．31％，強于100ktg／mL槲皮素88．74％的清除活性；原提取液稀釋200倍時，五種提取物羥自由基清除活性均大于100pg／mL槲皮素；原提取液稀釋50倍時，芍藥花甲醇提取物的超氧陰離子自由基清除活

3、性為58．73％，強于100pg／mL槲皮素49．23％的清除活性。結果表明，芍藥花甲醇提取物和水提取物具有很強的自由基清除活性，這可能與它們含有多酚類物質有關。2．芍藥花不同萃取物抗氧化和抗炎活性采用DPPH自由基清除實驗、蛋白保護實驗、超氧陰離子自由基清除實驗、總抗氧化實驗以及總還原力實驗評估芍藥花石油醚萃取物、乙醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物以及水萃取物的抗氧化活性，結果表明乙酸乙酯萃取物抗氧化活性最強，其次是乙醚萃取物。乙酸乙酯萃取物和乙醚萃取物清除DPPH自由基的IC50值分別為4．71pg／mL和7．31pg／mL，清除活性強于陽性對照BHA(IC50值為7．79gg

4、／mL)；濃度為lmg／mL時，蛋白損傷抑制率分別為81．36％和88．45％；濃度為400J．tg／mL時，超氧陰離子自由基清除揚州大學碩士學位論文率分別為77．73％乖N60．51％；兩種萃取物的總抗氧化能力與總還原力均隨著濃度增加而增強，其中乙酸乙酯萃取物的總抗氧化能力和總還原力強于陽性對照BHA。分別采用Folin．Ciocalteu比色法和亞硝酸鈉一硝酸鋁一氫氧化鈉比色法測定芍藥花不同萃取物的總酚含量和總黃酮含量，結果表明乙酸乙酯萃取物中的總酚含量和總黃酮含量分別為158．73mg／g和58．62mg／g，乙醚萃取物的總酚含量和總黃酮含量分別為190．48mg／g和43．66m

5、g／g。采用MTT法測定芍藥花不同萃取物對RAW264．7細胞的毒性作用以及對LPS誘導的RAW264．7細胞活力降低的抑制作用，結果表明芍藥花五種萃取物對RAW264．7細胞均沒有表現(xiàn)出細胞毒性，并且能夠抑制LPS引起的細胞活力的降低；其中乙酸乙酯萃取物抑制作用最強，濃度為400}tg／mL時，提高細胞存活率至83．96％。采用LPS誘導的RAW264．7細胞模型評估芍藥花不同萃取物的抗炎活性，結果表明乙酸乙酯萃取物和乙醚萃取物均具有很強的NO抑制活性，濃度為400gg／mL時，分別降低RAW264．7細胞內的NO含量至13．61％禾fl13．46％。3．芍藥花抗氧化和抗炎活性成分的提

6、取與分離采用硅膠柱層析(氯仿：甲醇=40：1，20：1，10：1，5：1，2．5：1，0：1)和SephadexLH．20凝膠柱層析分離芍藥花乙酸乙酯萃取物與乙醚萃取物，得到7個單一物質，記為A1．A7。通過HPLC．MS與標準品進行比對，最終鑒定Al為1，2，3，4，6．O．五沒食子酰葡萄糖，A2為沒食子酸甲酯，A3為紫云英苷。定量結果表明，芍藥花干燥粉末中A1．A3的含量分別為5．09％、3．30％_；fH3．39％。此外，結合HPLC．MS分析與相關文獻推測A4為槲皮素．3．O．B．D．葡萄糖苷，A5為山奈酚?7Op．D．葡萄糖苷，A6為山奈酚．3．O．B．D．(2”．沒食子酸酰)

7、葡萄糖苷以及A7為槲皮素．3．O．B．D．(2”．沒食子酰)葡萄糖苷。綜上所述，芍藥花具有抗氧化和抗炎活性，有望成為治療氧化應激與炎癥相關疾病的潛在藥物。芍藥花的抗氧化和抗炎活性可能與1，2，3，4，6．O．五沒食子酰葡萄糖、沒食子酸甲酯、紫云英苷、槲皮素．3．O．p．D．葡萄糖苷、山奈酚?7OB．D．葡萄糖苷等活性成分的存在有關。從芍藥花中提取分離出的多種化學成分為進一步研究芍藥花不同的藥理作用提供了物質基礎。關鍵詞：芍藥花，抗氧