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《粘連分子paraxial protocadherin在非洲爪蟾耳基板發(fā)育中的功能研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號UDC編號中國科學(xué)院研究生院碩士學(xué)位論文i金塞題目；粘連盆王瞼￡墼迦跑!Q￡曼墊皇￡也在韭洲巫蟾互基越發(fā)直蟲的功能班究指導(dǎo)教師工d：燕班窀雖生化細胞伍立赴瞌上洼生金型堂班巒院生物業(yè)堂皇細胞壘物堂班究匱申請學(xué)位級別亟±學(xué)科專業(yè)名稱筮直生物堂論文提交日期生。越。2Q蚯論文答辯日期量星壘：2Q蝤培養(yǎng)單位生型院上連生金越堂硒瘟院生物絲堂盞組胞生物堂班究壓學(xué)位授予單位蟲重型堂院班究生院中文摘要粘連分子ParaxialProtocadherin在非洲爪蟾耳基板發(fā)育中的功能研究脊椎動物的內(nèi)耳是聽覺的主要功能性器官。在內(nèi)耳發(fā)育過程中，最早出現(xiàn)的形態(tài)上可見的結(jié)
2、構(gòu)是位于胚胎兩側(cè)預(yù)定后腦和預(yù)定表皮旁的一個增厚的外胚層細胞區(qū)域，即耳基板。耳基板隨后內(nèi)陷形成一個耳杯，然后它從胚胎表皮脫落形成一個囊泡狀結(jié)構(gòu)稱為聽泡。聽泡細胞經(jīng)歷了一段強烈的增殖和復(fù)雜的細胞分化及形態(tài)發(fā)生時期，最終分化形成內(nèi)耳的各種細胞。在各種脊椎動物中，已經(jīng)證明多種信號分子和多個轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子等都與內(nèi)耳的特化和圖式建成有關(guān)。但是，還有許多發(fā)育的具體機制目前還不是很清楚。本論文報道了一個粘連分子cadhedn家族的成員ParaxialProtocadherin(PAPC)對于非洲爪蟾聽泡的形成是必需的。原位雜交結(jié)果表明，在肉眼可見的耳基板出現(xiàn)以前，P
3、APC已經(jīng)特異性地在耳基板的前體細胞中表達。在隨后的內(nèi)耳發(fā)育過程中PAPC持續(xù)特異性地表達在耳杯，聽泡等內(nèi)耳細胞中。PAPC的這種表達圖式強烈提示PAPC可能參與爪蟾內(nèi)耳的早期發(fā)育過程。同時，利用顯性失活質(zhì)粒DN—PAPC或M—PAPC競爭性地抑制PAPC的功能可導(dǎo)致聽泡結(jié)構(gòu)的缺失和早期內(nèi)耳特異性標(biāo)志基因Sox9和Tbx2的表達缺失，而且這一表型能夠被FL-PAPC共注射所拯救回復(fù)正常。這些結(jié)果都提示PAPC分子對于爪蟾胚胎早期的聽泡的形態(tài)發(fā)生和細胞特化是必需的。同時，研究發(fā)現(xiàn)PAPC異位注射并不足以誘導(dǎo)一個新的異源的耳基板的形成。中文摘要為了進一
4、步研究PAPc的蛋白水平的表達及其生物學(xué)功能，需要制備PAPC的抗體，但至今沒有商業(yè)化的PAPC抗體，其他文獻也末見相關(guān)報道。為此我們應(yīng)用GST表達系統(tǒng)表達融合蛋白PAPC—GST。然后用常規(guī)方法免疫新西蘭大白兔，獲得PAPC多克隆抗體。Westernblot分析發(fā)現(xiàn)，以1：3000稀釋的該多克隆抗體為一抗時，可以在轉(zhuǎn)染了全長PAPC(FL—PAPC)質(zhì)粒的HEK293T細胞的蛋白抽提物中雜交出特異的印跡條帶，PAPC蛋白可以競爭性抑制該抗體對FL．PAPC質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞的蛋白抽提物的特異性條帶。用1：500稀釋的該抗體為一抗進行免疫熒光分析，發(fā)現(xiàn)P
5、APC多克隆抗體能夠識別在爪蟾動物極中過表達的PAPC蛋白，而且其熒光信號是定位在細胞膜上，這更進一步說明了該多克隆抗體的專一性。有關(guān)PAPC抗體對爪蟾胚胎發(fā)育中的內(nèi)源的蛋白的識別實驗正在進行中。這項工作第一次證明粘連分子PAPC對于爪蟾聽泡的形成是必需的，為進一步研究內(nèi)耳的發(fā)育過程中細胞遷移和細胞命運決定的分子機制提供了很大的空間。關(guān)鍵詞：非洲爪蟾，PAPC，DN—PAPC，M—PAPC，耳基板，聽泡，內(nèi)耳，Sox9Tbx2，顯微注射，多克隆抗體4AbstractTheroleofParaxialProtocadherininXenopusoti
6、cplacodedevelopmentRui·yingHu(DevelopmentalBiology)DirectedbyProf．XiaoyanDi嗚Vertebrateinnereardevelopsfromitsrudiment，oticplacode，whichlaterformsoticvesicleandgivesrisetotissuescomprisingtheentireinnerear．Althoughseveralsignalingmoleculeshavebeenidentifiedascandidateresponsibl
7、eforinnerearspecificationandpatterning，manydetailsremainelusiveHere，wereportthatParaxialProtocadherin(PAPC)isrequiredforoticvesicleformationinXenopusembryos．PAPCisexpressedstrictlyinpresumptiveoticplacodeandlaterinoticvesicleduringinnerearmorphogenesis．KnockdownofPAPCbydominan
8、tnegativePAPCresultsinthefailureofoticvesicleformationandthel
