htral基因在卵巢癌細胞中的表達及其對卵巢癌侵襲遷移的影響

《htral基因在卵巢癌細胞中的表達及其對卵巢癌侵襲遷移的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。

1、重慶醫(yī)科大學碩士學位論文HtrAl基因在卵巢癌細胞中的表達及其對卵巢癌侵襲遷移的影響姓名：付麗麗申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：尹一兵；楊正林201205HtrAl基因在卵巢癌細胞中的表達及其對卵巢癌侵襲遷移的影響摘要目的：檢測HtrAl基因在卵巢癌細胞系(HO一8910，HO．8910PM)及不同病理分期卵巢癌組織中的表達差異水平；通過研究HtrAl基因對腫瘤遷移侵襲的影響，進一步探討HtrAl基因在卵巢癌侵襲遷移過程中可能的調節(jié)機制。方法：1．免疫組化檢測卵巢癌組織芯片HtrAl表達，包括30例不同病理分期的卵巢癌組織，10例匹配的轉移癌組織，8例正常組織。2．應用免疫細

2、胞化學法檢測HO．8910和HO．8910PM兩株細胞HtrAl的定位和表達，Westemblot檢測兩株細胞HtrAl蛋白水平上的表達差異。3．構建pcDNA3．1一HtrAl真核表達載體，并通過雙酶切及測序鑒定。4．以HO一89lO和HO．8910PM兩株細胞為研究對象，以轉染pcDNA3．1一HtrAl和HtrAl—siRNA為處理組，空載的pcDNA3．1和ScrambledsiRNA為對照組，IHFQ—PCR，Westemblot分別檢測轉染后各組HtrAl表達水平。5．CCK8檢測瞬時轉染后不同處理組細胞增殖水平變化。6．DAPI染色觀察轉染后各組細胞凋亡差異程度。7．Trans

3、well小室法以及細胞劃痕實驗觀察細胞轉染后遷移侵襲能力的改變。結果：1．免疫組化分析顯示在腫瘤組織與正常組織中HtrAl表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，轉移癌與原發(fā)腫瘤組織相比存在顯著1性差異(P<0．05)，但是不同病理分期的卵巢癌組織之間無明顯差異(P>0．05)。2．免疫細胞化學方法分析HtrAl在HO一89lO和H0-8910PM細胞株都有表達，主要定位在胞漿，Westernblot分析H0—8910細胞的HtrAl蛋白表達水平顯著高于HO一8910PM。3．成功構建pcDNA3．1一HtrAl真核表達載體，雙酶切及測序鑒定正確無突變。4．RTFQ．PCR，WestemBl

4、ot檢測轉染后處理組細胞與對照組細胞HtrAl表達水平存在顯著差異，外源表達及干擾作用效果明顯。5．轉染后細胞增值和凋亡水平未見明顯差異(P>0．05)。6．劃痕實驗中外源表達HtrAl的HO．89lO和HO．89lOPM細胞愈合率分別為31．4％，40．6％顯著低于對照組的40．8％和48％，而干擾表達后的細胞愈合率分別為49．8％，60．4％顯著高于對照組的42．2％和51．0％。7．Transwell小室法遷移試驗中，外源表達HtrAl的HO．8910和HO．8910PM細胞穿膜數(shù)量平均為41．2±3．7，53．6±4．2，顯著低于對照組的53．2±4．O，62．2±5．7(P

5、5)。而外源干擾表達后的平均穿膜細胞數(shù)分別為61．2±5．4，80．4±6．3，顯著高于對照組51．O±3．2，64．8±7．O(P

6、O一89lO細胞中的表達顯著重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文高于HO一8910PM，并且轉移腫瘤組織HtrAl表達顯著低于原發(fā)部位，提示HtrAl與腫瘤轉移存在相關性。3．外源表達HtrAl可有效抑制卵巢癌細胞的遷移和侵襲，應用siRNA導致HtrAlf氐表達后可以增強細胞的遷移侵襲的能力。關鍵詞：HtrAl；卵巢癌；轉移；侵襲THEEXPRESSIONOFHTRA1GENEINoVARIANCANCERCELLSANDEFFECToNINVASIoNANDMETASTASISABSTRACTObjective：Todetectthedi虢rentexpressionofoVariancanc

7、ercelllinesofHO一89l0，H0—8910PMandovariancancertissues．TosmdyhowHtrA1expressiononovariancancercell1inestoe虢ctthosecell’metastasisandinvasion，soastoeXploretheregulationmechanismduringovariancancerceHs’metasta