99tcm-survivin+mrna反義肽核酸在人肺癌a549荷瘤裸鼠體內(nèi)分布及顯像的研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下,由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果,其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文,第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué),試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則,承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。,‘_j0弋。,.,jo^.研究生簽名:試萌-,-gNi簽研究生簽名:凄隔二級學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章:?o一。?!?,,年多’前7再;糕、/;jj、,。、\’一一,,,::,一一/研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得

2、的研究成果,除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外,文中不包含其他人己發(fā)表或撰寫的研究成果,指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫,文責(zé)自負。研究螻名:齲翩麟月7日目錄IIllllllllrlflllllllIIlIlllflllllUllflHffrlY1901233........................................................................1........................................................................4....................

3、....................................................799Tcm-survivinmRNA反義肽核酸在人肺癌A549荷瘤裸鼠體內(nèi)分布及顯像研究......j.................................................................8方:法??????????????????????9........................................................................11;............................

4、............................................17........................................................................:Z1討論?????????????????????????23結(jié)論?????????????????????????27參考文獻???????????????????????28綜述反義技術(shù)在腫瘤診療中的應(yīng)用及研究進展????????31致謝???????????????????????????42個人簡歷?????????????????????????4

5、3de因放技,段構(gòu)(Gly.(D).Ala.Gly.Gly.),形成1個類似N4結(jié)構(gòu)的強螯合基團,為消除空間阻礙,引入1個P氨基丁酸(4.a(chǎn)minobutyricacid,Aba)作為隔離物,然后利用配體交換法進行99Tcm標(biāo)記。以同樣方法對無義肽核酸片段5’.TACCGTCTGCGA.3’進行99Tcm標(biāo)記。采用高效液相色譜法(hi曲performanceliquidchromatography,HPLC)對標(biāo)記物進行鑒定,測定標(biāo)記物的保留時間及放射性化學(xué)純度。以純乙腈為展開劑,分別用聚酰胺凝膠膜和快速硅膠紙兩種快速薄層層析法(instantthin.1ayerchromatography

6、,ITLC)對標(biāo)記物即刻標(biāo)記率進行綜合測定,并測定與人新鮮血清37℃保溫24小時后的標(biāo)記率,檢測探針的體外穩(wěn)定性。采用貼壁法培養(yǎng)人肺癌A549細胞,收獲對數(shù)生長期的細胞,制備成1x107個/0.2ml生理鹽水的單細胞懸液,接種到4周齡的雌性裸鼠的右前肢皮下,約14天后成瘤,待腫瘤直徑長至l~1.5cm時,選取腫瘤形態(tài)規(guī)則,色澤紅潤,中心無壞死的荷瘤裸鼠納入實驗。利用Rt.PCR實驗檢測人肺癌A549細胞及腫瘤組織中survivin基因mRNA的表達情況。細胞攝取率及滯留率實驗初步探討反義肽核酸在肺癌A549細胞中的藥代動力學(xué)作用。抽取30只荷瘤裸鼠,隨機分為反、無義體內(nèi)分布組,每組又分為l、

7、2、4h三個亞組,各5只,每只荷瘤裸鼠經(jīng)尾靜脈注射99TCm標(biāo)記的survivinmRNA反義或無義PNA(740kBq/0.1m1)后,分別于1、2、4h將對應(yīng)各組荷瘤裸鼠眼靜脈采血,處中文摘要死并解剖各組織或臟器,分別測定血液、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胃、腸道、腦、骨骼、肌肉及腫瘤等組織的重量及放射性計數(shù),并測定相同時刻標(biāo)準(zhǔn)源的放射性計數(shù),計算每克組織中放射性計數(shù)占標(biāo)準(zhǔn)源總放射性計數(shù)的比值(%ID/

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