京尼平苷對兔膝骨關節(jié)炎軟骨細胞影響的實驗研究

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1、分類號R6密級公開UDC610碩士學位論文京尼平苷對兔膝骨關節(jié)炎軟骨細胞影響的實驗研究學位申請人：趙振國學科專業(yè)：外科學指導教師：鮑同柱主任醫(yī)師二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineTheExperimentalStudiesofGeniposideonRabbits′KneeOsteoarthritisGraduateStudent:ZhaoZhenguoMajor:SurgerySupervisor:Ba

2、oTongzhuchiefphysicianChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峽大學碩士學位論文三峽大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果，除文中已經注明引用的內容外，本論文不含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體均已在文中以明確方式標明，本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：2013年5月三峽大學研究生知識產權承諾書本人承認：我作為三峽大

3、學碩士研究生在校學習期間，在導師指導下，依據(jù)研究工作所作學位論文的知識產權全部權歸三峽大學所有。本人承諾：我有義務維護三峽大學的知識產權，凡是以我本人學位論文內的全部或部分研究成果，或實驗數(shù)據(jù)為基礎所形成的研究論文及成果，無論是以何種形式刊發(fā)學術論文、進行成果鑒定或申報獎勵，均以三峽大學為第一作者單位或完成單位，并事先征得導師或學校相關部門的同意。我愿承擔因違背上述承諾而引起的一切法津和經濟后果。學位論文作者簽名：日期：2013年5月II三峽大學碩士學位論文內容摘要目的：本實驗通過研究京尼平苷對體外培養(yǎng)兔膝骨關節(jié)炎軟骨細胞的增殖、Ⅱ型膠原、周期蛋白2（CDC2

4、）表達和軟骨細胞培養(yǎng)上清液中IL-1、TNF-α含量的影響，探討京尼平苷對OA軟骨退變的保護作用及可能的機制，為臨床應用中藥梔子治療OA提供理論指導。方法：采用改良Hulth法制備兔膝OA模型(前交叉韌帶+內側副韌帶切斷、內側半月板切除)，15只日本大耳白兔隨機分為：A模型組12只；B正常組3只，通過形態(tài)學、影像學、生化指標鑒定模型，提取正常組、模型組軟骨細胞，原代培養(yǎng)、傳代。光鏡觀察原代、二代、四代細胞形態(tài)，免疫熒光和ELISA檢測模型組軟骨細胞Ⅱ型膠原表達以及細胞培養(yǎng)上清液中IL-1、TNF-α含量鑒定兔膝OA軟骨細胞。培養(yǎng)兔膝OA軟骨細胞應用不同濃度京尼

5、平苷（20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml）干預：噻唑藍染色（MTT）法檢測軟骨細胞增殖，Western-blot檢測Ⅱ型膠原及細胞分裂周期分裂基因2（CDC2）蛋白的表達，PCR檢測Ⅱ型膠原mRNA的表達；ELISA檢查培養(yǎng)兔膝OA軟骨細胞上清液中IL-1、TNF-α含量影響。結果：從形態(tài)學、影像學、生化指標表明改良Hulth法成功構建兔膝OA模型，關節(jié)液中IL-1含量為正常組77.64±9.37pg/ml；造模4W175.52±18.7pg/ml；造模8W363.42±54.11pg/ml，關節(jié)液中TNF-α含量為正常組：49.9

6、9±5.28pg/ml；造模4W143.38±48.34pg/ml；造模8W280.72±42.24pg/ml，血清中IL-1含量為正常組10.66±1.04pg/ml；造模4W51.19±4.66pg/ml；造模8W96.83±9.48pg/ml，血清中TNF-α含量為正常組15.74±1.05pg/ml；造模4W25.22±2.43pg/ml；造模8W46.15±7.04pg/ml（P<0.05）。原代兔膝OA軟骨細胞呈多角形，培養(yǎng)72h后基本貼壁，傳代后細胞生長加快，隨著傳代次數(shù)的增加細胞逐漸出現(xiàn)去分化現(xiàn)象，呈圓形，多短觸角；免疫熒光檢測模型組軟骨細胞中

7、有Ⅱ型膠原表達。ELISA檢測模型組軟骨細胞培養(yǎng)上清液中IL-1、TNF-α含量增高，IL-1含量為正常組6.948±0.48pg/ml；VS造模組65.47±5.52pg/ml，TNF-α含量為正常組5.13±0.74pg/ml；VS模型組45.49±3.99pg/ml（P<0.05）。鑒定兔膝OA軟骨細胞。隨著給藥濃度的不同（20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml）對兔膝OA軟骨細胞增殖有明顯的促進作用，各組24小時增殖率分別為（3.87±5.61）%、（23.48±3.50）%、（11.16±7.048）%、（9.29±3.43）

8、%；48小時增殖率分別為（30.01±