nf-κb圈套策略對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響

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1、碩士學(xué)位論文論文題目NF-κB圈套策略對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響研究生姓名黃思紅指導(dǎo)教師姓名周云教授專業(yè)名稱兒科學(xué)研究方向泌尿外科論文提交日期2013年3月NF-κB圈套策略對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響中文摘要蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)聲明學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究做出貢獻(xiàn)的個人和集體，

2、均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明引起的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名：黃思紅日期：2013-05-27I中文摘要NF-κB圈套策略對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)有關(guān)收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻(xiàn)信息情報中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所（含萬方數(shù)據(jù)電子出版社）、中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手

3、段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。涉密文件□本論文屬于在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密文件□（請在以上方框內(nèi)打“√”）論文作者簽名：黃思紅日期：2013-05-27指導(dǎo)老師簽名：周云日期：2013-05-27IINF-κB圈套策略對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響中文摘要NF-κB圈套策略對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響中文摘要目的：本實驗研究環(huán)狀啞鈴形圈套寡核苷酸（Circulardumbbelloligodeoxynucleotides，CD-ODN）轉(zhuǎn)染對核因子-κB（Nuclearfact

4、orkappaB，NF-κB）活性和神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步檢測凋亡抑制蛋白Survivin的表達(dá)情況，探索神經(jīng)母細(xì)胞瘤基因治療的新靶點。方法：電穿孔法將CD-ODN轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系，以未轉(zhuǎn)染基因的SK-N-SH細(xì)胞為空白對照。本實驗大致分三個部分：1、轉(zhuǎn)染CD-ODN后NF-κB活性的變化：免疫激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)NF-κB核轉(zhuǎn)位情況變化；酶聯(lián)免疫分析法（Enzyme-linkedimmunoassay，ELISA）檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κBp65表達(dá)的變化。2、轉(zhuǎn)染CD-ODN后

5、SK-N-SH細(xì)胞生物活性的變化：四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(methylthiazolyltetrazolium，MTT)檢測轉(zhuǎn)染CD-ODN后SK-N-SH細(xì)胞體外增殖活性的變化；流式細(xì)胞儀技術(shù)（Flowcytometry，F(xiàn)CM）檢測轉(zhuǎn)染CD-ODN對SK-N-SH細(xì)胞凋亡的影響。3、NF-κB活性抑制后凋亡抑制蛋白Survivin的表達(dá)變化：蛋白免疫印跡法（Westernblotting）檢測NF-κB活性抑制后凋亡抑制蛋白Survivin的表達(dá)情況，初步研究NF-κB與Survivin的關(guān)系。每個實驗重復(fù)三次。采用統(tǒng)計學(xué)方法分析實驗數(shù)

6、據(jù)。結(jié)果：免疫激光共聚焦顯微鏡觀察顯示轉(zhuǎn)染CD-ODN組SK-N-SH細(xì)胞細(xì)胞核熒光較空白對照組明顯減弱；NF-κBp65ELISA結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染24、48、72h后轉(zhuǎn)染CD-ODN組SK-N-SH細(xì)胞吸光度值A(chǔ)明顯低于空白對照組（p<0.05），表明轉(zhuǎn)染CD-ODN后SK-N-SH細(xì)胞NF-κBp65蛋白表達(dá)下降，NF-κB活性受到抑制。MTT檢測細(xì)胞增殖力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染CD-ODN組細(xì)胞MTT曲線幅度更小，以正常SK-N-SH細(xì)胞為對照，轉(zhuǎn)染后24、48、72h的細(xì)胞生長抑制率分別為12%、29%、42%（p<0.05）；流式細(xì)胞儀A

7、nnexinV/PI雙染色法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染CD-ODN48h后，轉(zhuǎn)染CD-ODNIII中文摘要NF-κB圈套策略對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響細(xì)胞組和空白對照組的細(xì)胞凋亡率分別為（23.01±0.71）%和(15.84±0.36)%（p＜0.05），轉(zhuǎn)染CD-ODN后細(xì)胞早期凋亡率增加。Westernblotting結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常對照組比較，轉(zhuǎn)染CD-ODN組SK-N-SH細(xì)胞凋亡抑制蛋白生存素（Survivin）的表達(dá)明顯下降。結(jié)論：CD-ODN能抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞內(nèi)NF-κB活性，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞

8、瘤腫瘤細(xì)胞早期凋亡，并且下調(diào)凋亡抑制蛋白Survivin的基因表達(dá)。這些實驗結(jié)果表明，CD-ODN可能通過阻斷NF-κB信號傳導(dǎo)通路來誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡，為以NF-κB為靶點的神經(jīng)母細(xì)胞