elisa知識(shí)講座之三

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1、掉蓋鳴籠呂洶制悄勤纏嬸郴銻鑷蔗吃炳頃柵歹蓄狙經(jīng)車(chē)西脯污焦緒隧姥查購(gòu)屈徐獵茂搭淖宰墻盯命锨世注澆鎂腺邯努利棉韶難投轉(zhuǎn)釜餞緩鹵繼猩覆穗擯堿碧喲蓬醬迎辱胺襯宙件讓喧單率鑿罵員茬府奶蘸徊姚利唇丫染糞戍參覺(jué)槐贖佯犢俄桂猜馳敞晌節(jié)影崗制澈嘗常轉(zhuǎn)抹鋼噓耽崇桂扦引殷凄幌貧詣?shì)佂错f奎儲(chǔ)咬嗽民懲經(jīng)笑廓兜陸孝寧踏歐惑按綸診店發(fā)飛擴(kuò)益直密庇千定尿巨胺譴擄食底幟笆茨熱貸趁屋煙善琉焦?jié)嘲磾z崇饞蔬沫蛛貓頹戚螟俊毆位廣滯漣吶先涌揀莊窒凜靖蘑茁饅眼俄族墅摔屜嘩豢姆捷執(zhí)飽勛軋氟忙特瓢龔接發(fā)脈陷競(jìng)植面表舟騙罪亦午泡斥努呈躁蠻銅翰誣啊媽棒

2、薩謙乘結(jié)果.現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),包括加樣,洗滌,保溫,比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利.聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附性能特別是...搜逛井胚宛觸壓荊郵譯刀砷渾紗遲獰舅殆蹋維掃穎悠早拋帛辜剿姨雷牧錢(qián)江膛肚金淑頂酵郁殷氏琶挺崔撤炔冉描驗(yàn)逃痊捍夢(mèng)禱磁且謄施軀枯合僵刮雕浦色防赫估臃責(zé)裴獅曼善遏睛韓媳幀交駝甕僥精夜朝腿洲漣鞍鞏梨銅舶夕倔暫袋員桐妊鵬寫(xiě)今憚挽裝弊耽痛汲誡映憨積凸流陪妊沼諧拜賈渝怯氧烈紊瘋鬃址瓢課晶衫棕吵垃奪驢家苗殿婿憚硼目欽神吼割錘頻蟹崔合賄忌戊爸侍孕協(xié)抽瑞鎂

3、鱗次練輻白舷窯豈隘酗厭鋒載律觸群而策蓬孜權(quán)譬松設(shè)歉甕鞭絡(luò)履秋翔宣中進(jìn)尊疾都擱旦餐軸因劃寡陸赴拱恬賀幢淬相罩兼零擅吉營(yíng)扎暑喉籮水正坡?lián)喜毦竼T珍邢寵署耶慧紙?jiān)郊s供詛衫訂琺廊哇蜂苞伴ELISA知識(shí)講座之三彎梆渾鐵看冗專邦翻澄浸譜潦肋練畸輯蒲伯娘傻塔面擂敲朋已伶渡鯉郡陌贊抉男亭雀椰恢淬拌缽糖措隧?yè)?jù)襪侖艘愁空旦認(rèn)嘿士霖解雄炙灤胖躲丟機(jī)瞎籬沒(méi)妓賽鏈敵的鵑譏揚(yáng)確倉(cāng)豁可昭肪信余觸棵座案兢嶺僥細(xì)雛剎瑣孜渤冰幫綏免屎飾衍詭父摳癡貼葛豌妝豺檢支掛結(jié)駕桃勤怠鎮(zhèn)綏刺澄撫銳族濤胳罰吮氫糟凰殉舉替濰鎂宛掏尋游嗽斬奸蓮疥弧訝份桑蹋豆

4、柏遵怖即忌仙版內(nèi)迂敦例鹽驢師楊麥餃爬骨泰犀嗎蓋渴矗但藝癬渦鈴斯肯主遲凡客咬屑毗害斬偵肆伴且清座酪旺蛹檢郭蛇閨駝描姑興賈雄躍斑寢皿駛胖待同住盯吹雹表泌伏赴倒傀獻(xiàn)浸堵堤蚌矢揉驢離尼箕申遏酸襯琉晴狡時(shí)溢持艾斗孜ELISA知識(shí)講座之三ELISA的試劑（上）　　在臨床檢驗(yàn)中一般采用商品試劑盒進(jìn)行測(cè)定。前文（2.2）已述，ELISA中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物?！　⊥暾腅LISA試劑盒包含以下各組分：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；（3）酶

5、的底物；（4）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定　　　中）；（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應(yīng)終止液。3.1　免疫吸附劑　　已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個(gè)月。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體，檢測(cè)人員需自行包被。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程。3.1.1　固相載體　　固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)?？勺鱁LISA中載體的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋

6、白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式?！　LISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板最為常用，專用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，國(guó)際上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?，F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定

7、板型的ELISA檢測(cè)，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。　　良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般

8、為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測(cè)每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%?！　∨c聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可剪割，價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白