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《hif-1α介導ggt對腦膠質瘤細胞遷移和侵襲作用的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、徐州院碩士學位論文HIF．1a介導GGT對腦膠質瘤細胞遷移和侵襲作用的研究中文摘要目的研究Geranylgeranyltransferase(GGT)對腦膠質瘤U251細胞遷移和侵襲的影響，并探討其作用機制，為膠質瘤的基因治療提供理論和實驗依據。方法1．分別應用細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測腦膠質瘤U251細胞遷移和侵襲能力。2．明膠酶譜實驗檢測腦膠質瘤U251細胞中MMP．2活性表達。3．WesternBlot檢測低氧條件培養(yǎng)0，6h，12h，24h，48h后腦膠質瘤U251細胞中HIF-la蛋白表達。4．設計并合成針對人HIF—la基因和GGT
2、l3基因的siRNAoligo，通過WB檢測干擾效果，并檢測GGTIg同源家族FTa和FTB蛋白表達來驗證GGTl3siRNA的特異性。5．采用GGT-298抑制GGTl3活性或用siRNA下調GGTl3表達后，WB檢測HIF．1a蛋白表達情況；并用siRNA下調HIF．1a表達后，檢測GGTl3蛋白表達情況。結果1．低氧培養(yǎng)6h，12h，24h，48h后人腦膠質瘤U251細胞中HIF—la蛋白表達較常氧條件下增多，提示低氧模型構建成功。2．與常氧條件相比，低氧促進腦膠質瘤U251細胞的遷移和侵襲，且上調MMP．2的活性。3．與陰性對照相比，用siRNA下調HI
3、F．1a和GGTIg的表達均可抑制人腦膠質瘤U251細胞遷移、侵襲和MMP．2的活性。4．應用siRNA下調GGTp后，FTa和FTIg蛋白表達均無變化，提示構建的GGTIgsiRNA具有特異性。5．應用GGT-298抑制GGT活性或用siRNA下調GGT[3表達后，HIF．10t蛋白水平降低；而下調HIF．1a對GGTl3蛋白水平無影響。6．與對照組相比，過表達GGT[3可增加U251細胞遷移和侵襲能力，而下調HIF．1a的表達則可逆轉GGTl3的此種作用。結論腦膠質瘤細胞中GGT可能通過HIF．1a調節(jié)細胞的遷移和侵襲。關鍵詞腦膠質瘤；低氧；遷移；侵襲；HI
4、F．1a；GGT徐州院碩士學位論文GGTregulatesHIF--la--mediatedglioblastomacellmigrationandinvasionAbstractObjectiveTostudytheimpactofGeranylgeranyltransferase(GGT)ongliomaU251cellsmigrationandinvasion，andexploretheinvolvedmechanism，whichmayprovideatheoreticalandexperimentalbaseofgenetherapyinglioma．
5、Methods1．ToanalyzegliomaU251cellsmigrationandinvasionbywoundingassayandinvasionassay,respectively．2．TheGelatinZymographywasusedtodetecttheactivityofMMP-2．3．TheproteinexpressionofHIF—lainbraingliomaU251cells0，6h，12h，24，48hafterhypoxiawasstudiedbyWesternBlot(WB)．4．Toexaminetheefficienc
6、yofdesignedandsynthesizedGGTl3siRNAandHIF-lasiRNAbyWB，andstudythespecificityofOGTl3siRNAoligobyanalyzingtheproteinexpressionofFTaandFTl3，thehomologousfamilyofGGT．5．TodetecttheproteinexpressionofHIF—laaftersuppressionofGGTactivitybyinhibitorGGT-298ordownregulationtheexpressionofbysiRN
7、Aoligo；andanalyzetheproteinexpressionofGGTl3afterHIF—ladepletionbyWB．Results1．TheproteinexpressionofHIF—lawashigher6h，12h，24，48hafterhypoxiacompared、析tllnormoxiaingliomaU251cells．suggestingthemodelofhypoxiaenvironmentissuccessful．2．Comparedwithnormoxia，HypoxiaincreasedgliomaU251cells
8、migration，in
