烏司他丁對(duì)熱打擊大鼠肺損傷的保護(hù)作用

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1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文烏司他丁對(duì)熱打擊大鼠肺損傷的保護(hù)作用Protectiveeffectsofulinastatinonlunginjurycausedbyheatstressinrats課題來(lái)源：南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院院長(zhǎng)基金學(xué)位申請(qǐng)人田培導(dǎo)師姓名秦再生副教授專業(yè)名稱麻醉學(xué)培養(yǎng)類型專業(yè)型培養(yǎng)層次碩士研究生所在學(xué)院第一臨床學(xué)院2013年5月9日碩士學(xué)位論文舢刪川Ⅲ洲圳咖l㈨㈣Y2405532烏司他丁對(duì)熱打擊大鼠肺損傷的保護(hù)作用碩士研究生：田培指導(dǎo)教師：秦再生副教授摘要研究背景：隨著全球氣溫變暖和熱浪襲擊強(qiáng)度和頻率的不斷增加，熱射病(HcatsUokc，HS)的發(fā)病率逐年上升，

2、已經(jīng)成為臨床常見的危重癥之一，如得不到及時(shí)妥善的救治，死亡率高達(dá)40％至50％。熱射病造成組織損傷及器官功能障礙的機(jī)制至今未明，早期認(rèn)為主要是熱應(yīng)激個(gè)體體溫調(diào)節(jié)中樞功能紊亂、急性期反應(yīng)加重和熱應(yīng)激蛋白(heatstressprotein，HsP)!表達(dá)異常三個(gè)方面單獨(dú)或協(xié)同的作用結(jié)果，目前普遍認(rèn)為是熱打擊的直接損傷及熱損傷后繼發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合征(SystemicInflammatoryResponseSyndrome，SIRS)引發(fā)的多器官功能障礙綜合征(MmtipleOrganDysfunctionSyndrome,MODS)的過程。烏司他丁是從人體尿液中分離純化的一種胰蛋白酶抑制

3、劑，屬于Kunitz型的絲氨酸蛋白水解酶抑制劑，它包含了一個(gè)糖基化區(qū)域和兩個(gè)Kunitz型活性功能域，其中糖基化區(qū)域能夠穩(wěn)定溶酶體、抑制炎性細(xì)胞因子釋放，兩個(gè)Kunitz型活性功能域均有很廣的抑酶譜，能夠抑制組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、纖溶酶等多種水解酶的活性，同時(shí)U11代謝形成的低分子成分也具有抑制水解酶的作用，因此UTI能抑制體內(nèi)多種蛋白、糖和脂類水解酶的活性，清除氧自由基，穩(wěn)定溶酶體膜，抑制多種炎性介質(zhì)的過度釋放，從而改善微循環(huán)、減少組織缺血再灌注損傷，阻斷SIRS／MODS的進(jìn)程，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于急性胰腺炎、感染性休克、DIC的治療，具有明顯的臟器保護(hù)功能。目的：我們希望通過高熱打擊

4、復(fù)制熱射病大鼠動(dòng)物模型，一方面觀察高熱對(duì)大鼠肺組織的損傷特點(diǎn)；另一方面研究不同時(shí)間給予烏司他丁干預(yù)是否對(duì)高熱造成的肺損傷具有保護(hù)作用，從而指導(dǎo)熱射病患者的臨床治療實(shí)踐。摘要材料和方法：1．動(dòng)物及分組健康清潔級(jí)雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量180～220g，隨機(jī)分為5組，每組12只。(1)C組(正常對(duì)照組)：將大鼠置于常溫中不給予烏司他丁干預(yù)(2)H組(高溫不給藥組)：大鼠熱打擊處理但不給予烏司他丁干預(yù)(3)HU組(高溫烏司他丁預(yù)處理組)：大鼠熱打擊前給予烏司他丁5x104U／kg(4)HUl組(高溫開始1小時(shí)后給藥組)：大鼠熱打擊1小時(shí)時(shí)給予烏司他丁5×104U／kg(5)n02組(高溫開始

5、2小時(shí)后給藥組)：大鼠熱打擊2小時(shí)時(shí)給予烏司他丁5×104U／kg2．動(dòng)物模型的制備大鼠用3％戊巴比妥鈉按45mg／l(g腹腔注射麻醉，待麻醉成功后分離暴露出股靜脈，行股靜脈穿刺置管術(shù)，大鼠放入具備生物氧供給的加溫艙之前檢測(cè)肛溫作為基礎(chǔ)值，然后將其放入溫度為35"C、濕度60％的動(dòng)物艙中加熱，加熱開始時(shí)、加熱1小時(shí)、加熱2小時(shí)按分組情況經(jīng)股靜脈給予相應(yīng)藥物(溶于生理鹽水)或同等量生理鹽水(加熱開始時(shí)、加熱1小時(shí)、加熱2小時(shí)分別給予HU組、HUl組、HU2組烏司他]-5×104U／蠔，其他兩組To時(shí)給予同等量生理鹽水)，加熱2．5小時(shí)后將大鼠撤離動(dòng)物艙并給予相應(yīng)的處理。3．觀察指標(biāo)3．1實(shí)

6、驗(yàn)開始時(shí)間以To表示，加熱期間每30分鐘人工采集呼吸頻率和肛溫1次，共記錄6次，分別以分別以To、T30、T60、T90、T120、T150表示。To和T150時(shí)分別采集動(dòng)脈血，血?dú)夥治觥?．2肺組織W／D值測(cè)定每實(shí)驗(yàn)組取大鼠6只，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)開胸取左上肺組織，用濾紙吸除表面水分及血漬，置于稱量皿中稱重，記錄肺組織的濕重，放入80"C恒溫烤箱內(nèi)烤72hII碩士學(xué)位論文稱干重，測(cè)定W／D值。3．3肺微血管通透性的測(cè)定每組取6只大鼠按伊文思藍(lán)含量測(cè)定法計(jì)算出肺組織EB滲出量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前30min按2ml／kg經(jīng)股靜脈注射2％伊文思藍(lán)液，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)開胸取部分左下肺，剪去周圍組織，吸干表面水分及血

7、漬，置于稱量皿中稱濕重，將肺組織碾碎后按1009加入盛有l(wèi)ml甲酞胺溶液的試管中，置37。C恒溫水箱中抽提48h，待組織中色素全部浸出，取出組織，離心10分鐘，取上清液，用多光譜微孔閱讀器測(cè)定在620nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出肺組織EB含量。3．4光鏡標(biāo)本的采集及觀察高溫結(jié)束時(shí)，打開大鼠胸腔，取右上肺組織浸入4％多聚甲醛內(nèi)固定24h，常規(guī)灑精脫水，石蠟包埋，超薄切片，HE染色，光鏡下觀察病理變化并攝片。3．5電鏡標(biāo)本