盤針孢菌發(fā)酵及其胞外多糖抗氧化活性

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1、ShortCommunication研究簡報微生物學(xué)報ActaMicrobiologicaSinica48(10)：1398~1402;4October2008ISSN0001-6209;CN11-1995/Qhttp://journals.im.ac.cn盤針孢菌發(fā)酵及其胞外多糖抗氧化活性11112葉明，李世艷，張利兵，蔣艷，莊文穎1（合肥工業(yè)大學(xué)生物與食品工程學(xué)院，合肥230009）2（中國科學(xué)院微生物研究所真菌地衣系統(tǒng)學(xué)重點實驗室，北京100080）摘要：【目的】研究盤針孢菌的發(fā)酵條件及其胞外多糖(EPS

2、)抗氧化活性。【方法】分別研究碳源、氮源、生長因子、pH值和培養(yǎng)時間等條件對盤針孢菌多糖產(chǎn)量的影響作用，并通過測定其多糖的還原能力及對羥自由基（·OH）和1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基的清除作用研究該多糖的抗氧化活性?！窘Y(jié)果】盤針孢菌多糖發(fā)酵的最佳條件為20%的馬鈴薯浸汁，20g/L麥芽糖，5g/L(NH4)2SO4，0.01g/LL-胱氨酸，pH5.0，25℃下培養(yǎng)10d。在此條件下，多糖產(chǎn)量達到37.52mg/L，與在基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基條件下相比，其多糖產(chǎn)量提高了84.10%。盤針孢菌多糖對·OH和D

3、PPH自由基均有較好的清除作用，在多糖濃度為50mg/L時，對·OH的清除率達到50.81%；多糖濃度為20mg/L時，對DPPH自由基的清除率達到14.21%?！窘Y(jié)論】發(fā)酵條件對盤針孢菌多糖代謝具有重要的調(diào)控作用，且該多糖具有明顯的抗氧化活性。關(guān)鍵詞：盤針孢屬；胞外多糖；抗氧化活性中圖分類號：TQ929.2文獻標識碼：A文章編號：0001-6209(2008)10-1398-05自20世紀50年代末人們發(fā)現(xiàn)多糖抗腫瘤活性以大學(xué)微生物資源與應(yīng)用研究室分離保藏菌種。來，產(chǎn)多糖真菌的研究受到越來越廣泛的重視[1]。

4、研究[6]1.1.2培養(yǎng)基：改良PDA培養(yǎng)基：20%的馬鈴薯浸表明多糖在抗腫瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、汁，蛋白胨5g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水定[2]抗凝血等方面發(fā)揮著生物活性作用。近幾年，微生物容至1000mL，自然pH；基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基：改良PDY多糖越來越受到人們的青睞。利用微生物生產(chǎn)多糖可以培養(yǎng)基(不加瓊脂的改良PDA培養(yǎng)基)；20%的馬鈴薯不受季節(jié)變化的影響，微生物多糖的收集與純化相對于浸汁的制備：將馬鈴薯200g洗凈去皮切片，加蒸餾水[3]植物和海藻多糖更容易。微生物多糖結(jié)構(gòu)、性能各異

5、，1000mL煮沸半個小時，4層紗布過濾，濾液于4℃下冷可供選擇余地大，與植物相比，更通過生物工程技術(shù)定藏24h，5000r/min離心，棄沉淀得到的上清液即20%向改變微生物的遺傳特性，從而生產(chǎn)出預(yù)定的多糖產(chǎn)品。的馬鈴薯浸汁（經(jīng)測定其淀粉含量為0.53%）。目前，國內(nèi)外對盤針孢屬(Libertella)的研究主要1.1.3主要試劑和儀器：2,6-叔丁基對甲酚(BHT，德[4,5]集中在萜類毒素和其它生物堿類產(chǎn)物方面。本研國進口分裝)，1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH，Sigma），究首次對一株盤針孢菌的發(fā)酵條

6、件及其胞外多糖的L-色氨酸、L-胱氨酸、甘氨酸和L-酪氨酸等均為國產(chǎn)體外抗氧化活性進行研究，以期為盤針孢菌多糖的研分析純。RE-85Z旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海青浦滬西儀器廠），發(fā)和工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。TDL-50B離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠），721E型可見光光度計（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）。1材料和方法1.2菌種培養(yǎng)1.1材料取斜面保藏菌種，接入PDA平板培養(yǎng)基上活化1.1.1菌株：盤針孢菌(Libertella)YM-28，合肥工業(yè)8d，作為發(fā)酵的種子?；痦椖?安徽省自然科學(xué)基金項目(050430502);安徽

7、省重點科研計劃項目(07020303053)作者簡介:葉明(1959?),博士,教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事微生物資源與應(yīng)用研究。E-mail:yeming123@sina.com收稿日期:2008-03-18;修回日期:2008-05-19葉明等：盤針孢菌發(fā)酵及其胞外多糖抗氧化活性./微生物學(xué)報(2008)48(10)13991.3多糖的測定測定：參照文獻[9]。[7]1.5.2YM-28胞外多糖對DPPH自由基的清除作用：參考姚良同等方法，略作修改，得回歸方程為?4y=1.0222x?0.0073。將50mL

8、發(fā)酵液過濾，濾液濃縮，將不同濃度的多糖溶液2mL與2mL2×10mol/L加2倍體積的無水乙醇，4℃下醇沉。離心除去上清，DPPH溶液均勻混合，30min后在525nm處測定其吸?4沉淀依次以無水乙醇，丙酮，乙醚洗滌，真空干燥得光度Ai，同時用同法測定2mL2×10mol/LDPPH溶胞外多糖(EPS)粗品。液與2mL蒸餾水混合后的吸光度Ac，以及2mL不同將EPS粗品蒸餾水溶解并定容