杜仲組織培養(yǎng)及愈傷組織植株再生體系的建立

杜仲組織培養(yǎng)及愈傷組織植株再生體系的建立

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1、TissueCultureofEucommiaulmoidesOliv.a(chǎn)ndtheEstablishmentofPlantRegenermionSystemthroughCallusbyWANGZhengAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofAgriculture1nLandscapeplantsandHorticulture1nCen仃alSouthUniversityofForestryandT

2、echnology498ShaoshanSouthRoad,TianxinDistrictChangshaHunan410004,P.R.CHINASupervisorProfessorJINXiaolingMay,2013學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明嬲剿嬲必本人鄭重聲明:所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品,也不包含為獲得中南林業(yè)科技大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人

3、和集體,均已在文中以明確方式表明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名:王/砬如/弓年舌月g日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件或電子版,允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)中南林業(yè)科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于:1、保密口,在年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密囪。(請您在以上相應(yīng)方框打“4’’)作者簽名:王經(jīng)Ⅻ

4、房年彭月踟導(dǎo)師簽名:7◇f杜仲組織培養(yǎng)及愈傷組織植株再生體系的建立摘要杜仲(EucommiaulmoidesOliv.)是我國特有的經(jīng)濟(jì)和藥用植物,是國家二級保護(hù)植物。實驗在唐亮的研究《杜仲優(yōu)良無性系快速微繁殖技術(shù)研究》的基礎(chǔ)上,優(yōu)化了杜仲組織培養(yǎng)體系,著重建立了以愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織誘導(dǎo)叢生芽、壯苗生根路線為基礎(chǔ)的植株再生體系,為杜仲轉(zhuǎn)基因分子研究提供材料和技術(shù)平臺,同時獲得了大量杜仲優(yōu)良品種的苗木。實驗采用杜仲優(yōu)良品種華仲5號為材料,以成熟胚、幼嫩胚、葉片、子葉和莖段(帶芽或不帶芽)為外植體進(jìn)行了芽和愈傷組

5、織的誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)、傷組織誘導(dǎo)叢生芽的形成、不定芽的增殖和芽的生根培養(yǎng)等研究,篩選了各個階段的適宜培養(yǎng)基,建立了杜仲組織培養(yǎng)技術(shù)體系。取得以下主要結(jié)果:1.成熟胚、幼嫩胚、葉片、子葉和不帶芽莖段等外植體都能夠直接誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織,但它們適宜的培養(yǎng)基配方不同。成熟胚:MS+BA2.0mg/L+NAA2.5mg/L,誘導(dǎo)率70%;幼嫩胚:MS+BA0。5mg/L+2,4一D2.0mg/L,誘導(dǎo)率88.9%;葉片:MS+BAl.0mg/L+NAAl.0mg/L,誘導(dǎo)率66.7%;莖段:MS+BA2.0mg/L+NAA0

6、.5mg/L,誘導(dǎo)率100%;子葉:MS+BA0.5.1.0mg/L+NAA2.5mg/L,誘導(dǎo)率88.9%。2.愈傷組織繼代培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基配方為:MS+BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L增殖系數(shù)250%和MS+NAAl.0mg/L+TDZ0.5mg/L,增殖系數(shù)200%;適宜的愈傷組織繼代周期為20天。3.愈傷組織在MS+BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L的培養(yǎng)基上,能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽,誘導(dǎo)率88.9%,增殖系數(shù)3土1.19,并且繼代2次的愈傷組織誘導(dǎo)叢生芽的效果最好。4.成熟胚和帶芽莖段可以

7、直接誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽,成熟胚的適宜培養(yǎng)基為MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L,誘導(dǎo)率80%;帶芽莖段為:MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L誘導(dǎo)率88.9%。4—6月間采集的枝條萌芽率最高達(dá)88.9%,且染菌率很低。5.芽增殖適宜的培養(yǎng)基配方是MS+BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L,增殖率33.3%;芽繼代培養(yǎng)的次數(shù)不同,對于其本身叢生芽的增殖和腋芽中南林業(yè)科技大學(xué)碩士論文的萌芽情況有影響;經(jīng)過了3次繼代培養(yǎng)的芽,長度在3.4cm左右,適合進(jìn)行生根培養(yǎng);使用無菌苗頂芽對于叢生芽的增殖和

8、腋芽的萌芽均較為有利。6.生根培養(yǎng)、煉苗和移栽:生根培養(yǎng)中,無論激素是否參與都能夠正常誘導(dǎo)出根,其中以添加了IBA0.2mg/L的無機鹽離子強度較低的1/4MS培養(yǎng)基效果最好,生根率達(dá)到80%,且根從基部長出,數(shù)量多,有利于移栽。移栽基質(zhì)為等量的泥炭土和珍珠巖混合,成活率66.7%。關(guān)鍵詞:杜仲(EucommiaulmoidesOliv.);組織培養(yǎng);愈傷組織;繼代周期;

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