甲基間苯三酚衍生物的合成、抗菌活性評價(jià)及作用機(jī)制研究

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1、廣東藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文分類號：___________密級：__________UDC：___________甲基間苯三酚衍生物的合成、抗菌活性評價(jià)及作用機(jī)制研究姓名：林鵬飛學(xué)號：2111548028院系：中藥學(xué)院學(xué)位類型：學(xué)術(shù)學(xué)位專業(yè)：中藥化學(xué)研究方向：中藥及復(fù)方化學(xué)成分研究導(dǎo)師：沈志濱論文提交日期：2018年3月20日論文答辯日期：2018年5月25日學(xué)位授予單位：廣東藥科大學(xué)二〇一八年五月廣東藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文Synthesis,AntibacterialActivityandMechanismofActionofMethylPhloroglucinolDeri

2、vativesCandidate：PengfeiLinStudentID：2111548028Affiliation：SchoolofTraditionalChineseMedicineAcademicDegreeApliedfor：MasterofMedicineSpeciality：ChemistryofChinesemateriamedicaSupervisor：Prof.ZhibinShenAssistantSupervisor：Prof.LianbaoYeDayofDefence：May2017Degree-Conferring-Institution：Gua

3、ngdongPharmaceuticalUniversity52018廣東藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文廣東藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文甲基間苯三酚衍生物的合成、抗菌活性評價(jià)及作用機(jī)制研究摘要香鱗毛蕨Dryopterisfragrans（L.）schott為鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物，近代研究發(fā)現(xiàn)香鱗毛蕨對多種由真菌引起的皮膚病具有顯著療效，而且間苯三酚類化合物為鱗毛蕨屬植物的主要活性成分。本課題組從該植物中分離出多種間苯三酚類化合物，藥理研究表明間苯三酚類化合物具有較強(qiáng)的抗真菌活性，其中綿馬酚對常見的皮膚真菌表現(xiàn)出最強(qiáng)的活性。甲基間苯三酚作為綿馬酚的中間體，由于其結(jié)構(gòu)的活潑性和取代基的多樣性

4、，使得甲基間苯三酚的結(jié)構(gòu)可以衍生出多種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的化合物；課題組前期研究發(fā)現(xiàn)甲基間苯三酚的羥基為化合物活性基團(tuán)，并且C-4或C-6為活潑位點(diǎn)，在此位置引入不同的基團(tuán)或可使得化合物性質(zhì)、生物活性發(fā)生改變。因此，本研究首先在甲基間苯三酚結(jié)構(gòu)中引入不同的官能團(tuán)，得到新的間苯三酚類化合物，然后通過抗菌活性研究結(jié)合分子模擬試驗(yàn)和雙抗體夾心法試驗(yàn)（ELISA法），考察引入不同基團(tuán)后所得化合物抗菌作用及作用機(jī)制，為間苯三酚類化合物抗真菌作用及作用機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。本次研究主要目的有：（1）以綿馬酚中間體甲基間苯三酚為基礎(chǔ)，引入丁酰基及特比萘芬起效基團(tuán)-烯丙氨基，建立甲基間苯三酚衍生物

5、的合成方法、路線。（2）通過抗真菌活性篩選及動態(tài)殺菌曲線的研究，考察間苯三酚類化合物抗菌活性及起效時間。（3）基于分子模擬試驗(yàn)及酶活性驗(yàn)證試驗(yàn)，考察甲基間苯三酚衍生物抗真菌作用靶點(diǎn)及作用I廣東藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文機(jī)制，為進(jìn)一步闡明間苯三酚類化合物的抑菌作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容如下：1.間苯三酚衍生物的合成：以間苯三酚為原料，合成間苯三酚甲醛，經(jīng)過還原反應(yīng)得到甲基間苯三酚，在經(jīng)過傅-克反應(yīng)引入丁?；?13烯丙氨基，最終得到目標(biāo)化合物，得到的化合物通過MS、H-NMR、C-NMR等手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。2.根據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）M38-A2方法分別測定

6、各化合物對紅色毛癬菌、石膏樣小孢子菌、須癬毛癬菌以及犬小孢子菌的最低抑菌濃度（MIC）及最低殺菌濃度（MFC），從中篩選出活性最強(qiáng)的化合物及最敏感的真菌。3.采用菌落計(jì)數(shù)法測定不同濃度的受試化合物對犬小孢子菌的殺菌曲線，考察受試化合物對受試真菌的動態(tài)抑制作用。4.采用DiscoveryStudio2.5.5軟件及AMBER9.0軟件進(jìn)行分子對接模擬和分子動力學(xué)模擬，通過受試藥物與靶點(diǎn)之間對接的-CDOCKERenergy以及分子動力學(xué)模擬的RMSD值，比較受試藥物與靶點(diǎn)之間的結(jié)合作用的強(qiáng)弱及結(jié)合的穩(wěn)定性，探討其可能的抑菌機(jī)制。5.采用UPLC法建立麥角甾醇的含量測定方法

7、，考察犬小孢子菌經(jīng)化合物作用后，麥角甾醇含量的變化。6.采用ELISA法，考察各藥物組對羊毛甾醇14α-去甲基酶（CYP51）、角鯊烯環(huán)氧化酶（squaleneepoxidase）及β-1,3葡聚糖合成酶（glucansynthese）等三種酶活性的影響，進(jìn)一步探討化合物抑菌機(jī)制。II廣東藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文研究結(jié)果如下：1.甲基間苯三酚衍生物合成試驗(yàn)結(jié)果顯示：以間苯三酚為原料，經(jīng)過Vilsmeier-Haack反應(yīng)、還原反應(yīng)，傅-克反應(yīng)等方法成功合成了甲基間苯三酚，然后對甲基間苯三酚進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，結(jié)果得到了4種衍生物，即2-甲基-4-丁