色素上皮衍生因子對大鼠角膜新生血管抑制作用的研究

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1、南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文色素上皮衍生因子對大鼠角膜新生血管抑制作用的研究Studyofinhibitoryeffectofpigmentepitheliumderivedfactor(PEDF)oncornealneovascularizationinrats課題來源:自選課題學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院朱丹陸曉和教授眼科學專業(yè)型碩士第二臨床醫(yī)學院2013年4月日廣州碩士學位論文IPlllllMIIIIIIIIJIIIIIIIIIIIIIIlllllllllllll

2、lIY2406050色素上皮衍生因子對大鼠角膜新生血管抑制作用的研究碩士研究生:朱丹指導教師:陸曉和教授摘要研究背景正常角膜是無血管的、透明的結(jié)締組織,它具有眼部的機械屏障和屈光間質(zhì)的作用。同時角膜也是一個免疫豁免的組織,這也是角膜移植成功率較高的原因。血管生成是指新的血管從預先存在的血管結(jié)構(gòu)中生長出來的過程,許多病理條件都可能導致角膜新生血管的產(chǎn)生,并導致嚴重的后果。引起角膜新生血管的原因有:感染性和免疫性疾病、眼外傷、佩戴角膜接觸鏡等。角膜新生血管可影響視力,也是角膜移植術(shù)后發(fā)生移植排斥反應的

3、高危因素,并導致炎癥、角膜瘢痕和水腫產(chǎn)生。角膜新生血管的形成是一個復雜的病理過程,確切發(fā)病機制目前仍不清楚,主要有以下幾種學說(1)缺氧學說(2)炎癥學說(3)消除角膜水腫的機械屏障破壞(4)細胞因子平衡學說。目前多數(shù)學者傾向于細胞因子平衡學說,認為新生血管刺激因子與抑制因子之間的平衡失調(diào)是新生血管形成的重要機制。基于細胞因子平衡學說,目前對于新生血管性疾病治療的研究著眼于血管生成之間的平衡,一方面可以加強新生血管抑制因素,另一方面可削弱新生血管刺激因素。色素上皮衍生因子(pigmentepith

4、eliumderivedfactor,PEDF),是絲氨酸蛋白酶抑制劑家族中的非抑制性成員,是由單基因編碼、相對分子質(zhì)量為50000的糖蛋白,存在于所有的脊椎動物中,在不同物種間高度保守。它是一種多功能蛋白,已證實的功能包括神經(jīng)營養(yǎng)、親神經(jīng)元性、神經(jīng)保護、膠質(zhì)抑制、抗腫瘤、抗新生血管和抗血管滲漏。在抗新生血管方面,PEDF是已知摘要最強的內(nèi)源性血管抑制因子,是“加強新生血管抑制因素”最主要的方式,它在正常人眼組織中高表達,被認作是維持角膜、玻璃體無血管的關(guān)鍵因素。Avastin是VEGF—A的單克

5、隆抗體,是“削弱新生血管刺激因素”最主要的藥物,其用于抑制角膜新生血管已開展較多實驗研究,也有臨床報告,顯示出較好的療效。為了研究PEDF對角膜新生血管的作用,本實驗首先建立堿燒傷誘導大鼠角膜新生血管模型,然后運用PEDF制成滴眼液觀察其對新生血管的抑制作用,并與Avastin組比較,同時設立地塞米松組作為對照標準。第一部分堿燒傷大鼠角膜新生血管模型的建立目的探索堿燒傷誘導大鼠角膜新生血管(CNV)動物模型的建立,為下一步的實驗提供穩(wěn)定可靠的動物模型。方法隨機將24只SD大鼠分成3組,每組8只,右

6、眼作為實驗眼,左眼作為正常對照眼。采用浸潤lmol/L氫氧化鈉的3mm濾紙片,分別制作燒灼時間為20s、30s、45s的堿燒傷鼠眼模型,每天裂隙燈觀察角膜新生血管生長的情況,觀察7d。結(jié)果燒傷后7d,20s、30s和45s組CNV誘導率分別為62.7%、100%、100%,20s誘導率組分別與30s、45s組具有顯著性差異(P

7、影響到新生血管的觀察。結(jié)論采用浸潤lmol/L氫氧化鈉溶液的3mm濾紙片燒灼中央角膜30s的大鼠模型是角膜新生血管較理想的動物模型。碩士學位論文第二部分PEDF抑制堿燒傷誘導大鼠角膜新生血管的研究目的觀察局部應用PEDF對大鼠堿燒傷后角膜新生血管的抑制作用,并與Avastin比較;并初步探討PEDF抑制角膜新生血管的機制。方法1.建立實驗動物模型與分組:以右眼作為實驗眼,左眼為正常對照眼,建立堿燒傷誘導大鼠角膜新生血管模型,將40只SD大鼠隨機分為A、B、C、D4組,每組10只。A組于燒傷當天開始

8、點用10ug/mlPEDF滴眼液;B組于燒傷當天開始使用5mg/mlAvastin滴眼液;C組于燒傷當天開始使用0.1%地塞米松磷酸鈉滴眼液;D組于燒傷當天開始點用生理鹽水。均每同4次,每次10IlL,共用12日。2.角膜新生血管的觀察:從燒傷后第1天開始,每日用裂隙燈顯微鏡觀察角膜新生血管生長情況,于第7天行角膜燒傷程度分級,于第3、7、12天測量CNV長度和計算CNV面積,并于第12天照相。3.組織病理學檢查:燒傷后第12天,每組隨機取5只大鼠,麻醉后采用頸椎脫臼法處死,迅速摘

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