藍萼乙素抑制小膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)及其機制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY碩士學位論文論文題目藍萼乙素抑制小膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)及其機制研究研究生姓名陶荔指導(dǎo)教師姓名鎮(zhèn)學初教授專業(yè)名稱藥理學研究方向神經(jīng)藥理學論文提交日期2013年5月藍萼乙素抑制小膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)及其機制研究中文摘要中文摘要目的：研究藍萼乙素（GlaucocalyxinB,GLB）對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的小膠質(zhì)細胞的抗炎作用及其作用機制，探討藍萼乙素對炎癥介質(zhì)引起的神經(jīng)毒性的保護作用。方法：利用脂多糖刺激的BV-2細胞和原代小膠質(zhì)細胞，分別用Griess法和E

2、LISA法測定細胞上清液中一氧化氮（NO）和腫瘤壞死因子（TNF-α）的濃度，MTT法測定細胞活性；Real-timePCR法檢測炎癥因子iNOS、COX2、TNF-α和IL-1β的基因表達情況；Westernblot法檢測iNOS、COX2蛋白表達，IκBα的磷酸化和降解，MAPKs蛋白磷酸化；流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)活性氧（ROS）的水平；免疫熒光法觀察核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的核轉(zhuǎn)位情況；小膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元共培養(yǎng)方法檢測藍萼乙素對神經(jīng)元活性的影響。結(jié)果：藍萼乙素能夠顯著抑制激活的BV-2細胞和原代小膠質(zhì)細胞中NO以及TNF

3、-α的釋放，并且能顯著降低細胞內(nèi)ROS的水平；藍萼乙素能顯著抑制炎癥因子iNOS、COX2、TNF-α和IL-1βmRNA水平的表達，并且能夠降低iNOS和COX2蛋白水平的表達；在LPS誘導(dǎo)的BV-2細胞中，藍萼乙素可以抑制IκBα的磷酸化和降解，NF-κB的核轉(zhuǎn)位以及p38MAPK的磷酸化；藍萼乙素能降低激活的小膠質(zhì)細胞對原代神經(jīng)元的細胞毒性作用。結(jié)論：藍萼乙素通過抑制小膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的核轉(zhuǎn)位以及p38MAPK的磷酸化而產(chǎn)生抗炎作用并對炎癥介質(zhì)介導(dǎo)的神經(jīng)毒性具有保護作用。關(guān)鍵詞：藍萼乙素；小膠質(zhì)細胞；炎癥

4、反應(yīng)；神經(jīng)保護作者：陶荔指導(dǎo)教師：鎮(zhèn)學初教授I英文摘要藍萼乙素抑制小膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)及其機制研究GlaucocalyxinBinhibitsglialinflammatoryactivationviasurppressionofNF-κBpathwayAbstractObjective:Toinvestigatetheanti-inflammatoryeffectofglaucocalyxinB(GLB)inlipopolysaccharide(LPS)-stimulatedmicrogliacellsandneurot

5、oxicity.Methods:Inthisstudy,weuseLPS-stimulatedBV-2andprimarymicrogliacellsmodeltoinvestigatetheanti-inflammatorypropertiesofGLB.Theproductionofnitricoxide(NO)andtumornecrosisfactor(TNF)-αinculturemediumwasevaluatedbyGriessandELISAassay,andcellviabilitywasmeasure

6、dbyMTTassay;thegeneexpressionofinducibleNOsynthase(iNOS),cyclooxygenase(COX)-2,tumornecrosisfactor(TNF)-αandinterleukin(IL)-1βwereevaluatedbyReal-timePCR;theproteinexpressionlevelofiNOS,COX-2,phosphorylationanddegradationofIκBα,phosphorylationofmitogen-activatedp

7、roteinkinase(MAPKs)wasdeterminedbyWesternblotanalysis;Thegenerationofintracellularreactiveoxygenspecies(ROS)wasdetectedbyDCFH-DAusingflowcytometry;NF-κBnucleartranslocationwasanalyzedbyimmunofluorescence;amicroglia/neuroncoculturesystemwasappliedtostudytheneuropr

8、otectiveeffectofGLB.Results:GlaucocalyxinBsignificantlysuppressedtheproductionofNOandTNF-αinactivatedBV-2andprimarymicrogliacells,italsodecreasedthelevelofintr