血管抑素滴眼劑制備及其藥代動力學的相關(guān)研究

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1、南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文血管抑素滴眼劑制備及其藥代動力學的相關(guān)研究ResearchonthePreparationandthepharmacokineticsofAngiostatin課題來源：廣東省科技基礎(chǔ)條件建設(shè)項目編號：20098060700117學位申請人王芳導師姓名劉?？〗淌趯I(yè)名稱眼科學培養(yǎng)類型專業(yè)型培養(yǎng)層次碩士研究生所在學院南方醫(yī)科大學研究生學院2013年3月28日廣卅碩士學位論文血管抑素滴眼劑制備及其藥代動力學的相關(guān)研究碩士研究生：王芳指導教師：劉?？〗淌谡?、研究目的眼部新生血管性疾病是多種致病因素所致的眼部并

2、發(fā)癥，是損害視力的主要因素之一，包括由于燒傷或移植而引起的角膜血管新生、各種原因引起的脈絡(luò)膜血管新生及糖尿病引起的視網(wǎng)膜病變。作為一種血漿纖溶酶原的降解片段，血管抑素(angiostantin，As)以其強大的抗血管生成作用受到了人們的極大關(guān)注，自1994年O’Reilly等在荷蘭小鼠血清及尿中發(fā)現(xiàn)至今的近20年中，國內(nèi)外的研究者對其分子結(jié)構(gòu)、抗血管生成的分子機制及提取方法進行了深入而廣泛的探討，并取得了可喜的成果。多年來，伴隨著血管抑素的制備方法日臻完善，國內(nèi)外許多學者已應(yīng)用血管抑素對角膜、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜等眼部新生血管性疾病的防治工作做了

3、大量的基礎(chǔ)和臨床研究，取得了顯著的效果。而目前國內(nèi)外血管抑素的相關(guān)研究仍停留在動物實驗階段，為了推動血管抑素更早更快的進入臨床應(yīng)用，如能對血管抑素滴眼液的制備方法加以優(yōu)化，明確其處方，勢必將極大推動血管抑素在臨床的運用。因此，以《中國藥典》2010年最新版相關(guān)內(nèi)容為依據(jù)，在借鑒前人相關(guān)成功經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，本研究擬對血管抑素滴眼液的制備工藝進行完善，選擇合適的處方制備重組人Kringle1．3血管抑素滴眼劑，對血管抑素滴眼液的外觀、理化性質(zhì)進行考察，運用紫外光譜法與Draize法分別對重組人Kringle1．3血管抑素滴眼劑的穩(wěn)定性與刺激性進行

4、研究。高效液相色譜法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)i貝U定血管抑素滴眼液在摘要玻璃體中的濃度及分布，擬闡明血管抑素滴眼液的藥代動力學。通過其在眼內(nèi)藥代動力學指標的檢測，確定血管抑素的處方，旨在探索一種可用于臨床治療新生血管性疾病的血管抑素滴眼劑，以期規(guī)?；a(chǎn)，使其適用于臨床工作的需要，造福人類。二、研究方法與過程1、血管抑素滴眼劑的制備：配制含0．1％制備量的玻璃酸鈉(滴眼液級)的磷酸鹽緩沖溶液適量，稱取0．01％制備量的苯扎氯銨，溶解于適當體積的磷酸鹽緩沖液中，加入玻璃酸鈉溶液，后向

5、其中加入質(zhì)量分數(shù)為O．1％的EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二鈉鹽)，充分混勻，補加注射用水至制備量，即得血管抑素滴眼劑賦形劑溶液。將血管抑素滴眼劑賦形劑溶液于超凈工作臺中用0．22I．tm微孔濾膜除菌過濾得無菌血管抑素滴眼劑賦形劑溶液，量取適當體積無菌賦形劑溶液溶解適量重組人Kringle1．3血管抑素原料藥，渦旋震蕩至澄清透明，配制質(zhì)量分數(shù)為0．01％(即質(zhì)量濃度為10099／m1)血管抑素滴眼劑若干，封裝，即得重組人Kringle1．3血管抑素滴眼劑。2、血管抑素滴眼液質(zhì)量控制：1)性狀：采用留樣觀察法，觀察血管抑素滴眼液的顏色、澄明度

6、，鑒定是否存在異物。(按照《中國藥典》2010版附錄Ⅸ關(guān)于澄明度及可見異物的檢查法進行測定)；2)血管抑素滴眼液pH的檢測：使其pH符合《中國藥典》2010年版有關(guān)滴眼液的規(guī)定。3)血管抑素滴眼液含量的測定：紫外吸收光譜法測定血管抑素滴眼液中血管抑素的含量；4)血管抑素滴眼液的刺激性檢驗：采用新西蘭大白兔作為實驗?zāi)Ｐ?，運用Draize試驗進行評價；5)血管抑素滴眼液的穩(wěn)定性檢驗：因為常溫下血管抑素理化性質(zhì)不穩(wěn)定，所以將血管抑素滴眼劑樣品分別置于4。C+1℃及一20。C+2℃條件下保存，觀察樣品放置1月、3月及5月的外觀、澄明度及可見異物(沉

7、淀)，分別測定放置1、3、5月時樣品于280nm處的吸光度值，計算各時間點吸光度均值，評估重組人Kringle1—3血管抑素滴眼劑樣品第1、3、5月相對于0個月的主藥含量下降值，考察滴眼劑的穩(wěn)定性。碩士學位論文3、血管抑素滴眼液在兔眼內(nèi)組織的分布：健康、無眼疾新西蘭大白兔10只，隨機分成5組，每組2只4眼，血管抑素滴眼液滴眼給藥后選取0．5、1、2、5、8h5個取材點，各取材點取2只新西蘭大白兔共4眼角膜、房水及玻璃體組織，高效液相色譜法測定給藥0．5、1、2、5、8h后血管抑素滴眼液在角膜、房水及玻璃體中的濃度計分布(重復(fù)此實驗巾的HPL

8、C實驗2次)，繪制標準曲線并考察精密度及回收率。4、血管抑素滴眼液眼內(nèi)藥代動力學的檢測：將兔眼角膜、房水及玻璃體組織中的藥物濃度經(jīng)實用藥物動力學程序(3p97)進行擬合，擬合出符